免疫活性肽固相合成工艺及其降低牛奶体细胞数的研究

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牛奶中的体细胞数(somatic cell count,SCC)是指每毫升牛奶中的体细胞总数,其主要成分是白细胞,约占99%,其余1%为乳腺上皮细胞。SCC的高低直接反映出奶牛的健康状况,对乳成分和乳制品质量有着广泛和复杂的影响。随着人们对乳制品品质的要求日益提高,研究者们对控制体细胞数的研究也越来越重视,都在寻找能有效增强奶牛体质的产品。本研究中的免疫活性肽是用肽库技术筛选出的模拟多肽,其功能是改善细胞代谢,减少体内有害毒素的产生,增强机体的抵抗力和抗应激能力。临床表现在能有效降低牛奶的体细胞数,提高和稳定奶牛的产奶量,改善乳成分,具有十分广阔的市场前景。本研究旨在建立免疫活性多肽的固相合成方法并优化其工艺,以达到降低生产成本,适合规模化生产的目的。本研究以Fmoc氨基酸为原料,Wang树脂为载体,采用固相合成技术合成免疫活性肽。从氨基酸的保护、缩合试剂的选择、脱保护策略的比较及切割试剂的选用等方面研究了免疫活性肽的合成工艺,通过重复缩合、封闭残余树脂和困难氨基酸的活性位点等工艺提高了缩合率,用MALDI-TOF MS飞行质谱仪对合成产物进行了鉴定,使用反相高效液相色谱对粗肽进行了分离和纯化,系统完整的建立了整套合成-纯化工艺路线,确定了相关的工艺参数,并尝试进行了批量生产,在此基础上将所得免疫活性肽纯品进行奶牛喂养试验,研究了其对奶牛体细胞数、产奶量和乳成分的影响。在优化的免疫活性肽合成-纯化工艺路线下,实验室规模下得到粗肽纯度为80.02%,纯化后达到98.12%,纯化收率64.72%。试验结果得出此合成纯化工艺操作简单、周期短、合成效率高、成本低,进行合成规模放大(树脂量放大10倍)的批量生产,每批可得免疫活性肽粗品11.812g,收率83.24%,基本满足了生产需求。喂养试验结果表明,免疫活性肽明显增强了奶牛的免疫力,降低了牛奶体细胞数,提高了产奶量、乳脂率和乳蛋白率。
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