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原发性胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率高达25.53/10万,占恶性肿瘤全部死亡的23.93%。我国胃癌发病率很高,目前主要采取手术、手后放疗、化疗以及内生物治疗等综合疗法治疗胃癌。尽管由于内镜技术的发展,极大提高了早期胃癌的检出率和治愈率,但对于进展期胃癌来说,其预后仍然较差。因此,如何提高疗效、改善预后是胃癌研究的重点。侵袭和迁移是造成患者肿瘤转移的主要原因。但目前胃癌侵袭转移的分子机制尚未查明。寻找及研究胃癌侵袭转移相关基因,及其产物在胃癌进展过程中的表达变化与功能,不仅可以加深我们对于胃癌侵袭转移调控机制的理解和认识,同时也为胃癌的早期诊断和治疗靶向的发展提供理论基础。RNA干扰技术自问世以来,因其独特的原理和相比于其它基因治疗策略的优越性而被迅速应用于胃癌相关基因功能检测和基因治疗的研究中。MMP-9能够调节细胞的生长、侵袭和迁移,而且与肿瘤细胞的黏附、肿瘤血管生成以及细胞外基质的降解等相关,调节着细胞的生长侵袭和迁移。本课题重点研究了胃腺癌中MMP-9的异常表达,并应用RNA干涉技术干预MMP-9的表达,观察干预MMP-9后对胃腺癌细胞SGC7901恶性表型的影响及对裸鼠皮下SGC7901胃腺癌模型的治疗效果。课题分三部分进行:第一部分:首先利用组织芯片技术免疫组化的方法检测了MMP-9、PCNA、CD31以及VEGF等基因在胃腺癌中的表达情况。第二部分:在体外应用RNA干涉技术以oligofectamine介导siRNA靶向MMP-9转染人胃腺癌细胞SGC7901,应用realtime PCR检测目的基因的敲低情况,并用Western blot和免疫组化方法和激光共聚焦显微镜检测了RNAi沉默MMP-9的表达后,CD31、PCNA以及VEGF等基因的表达变化。并用Transwell、Matrigel Matrigel 2D,3D实验、“划痕”法实验以及MTT试验等方法分析了转染前后细胞侵袭,迁徙能力和增殖的变化。第三部分:建立SGC7901裸鼠胃腺癌皮下动物模型,待皮下肿瘤体积长至50～100mm~3时,原位注射siRNA混合物,连续观察4周,动态观察肿瘤生长情况。用免疫组化法检测转染后PCNA以及VEGF和CD31的表达变化。结果:第一部分:利用组织芯片通过免疫组化的方法发现与正常胃粘膜组织及癌旁组织比较,在胃腺癌中MMP-9、VEGF、PCNA以及CD31等基因的表达均有升高(MMP-9:正常30.0%癌旁64.4%胃癌82.2%;VEGF:正常30.0%癌旁62.2%胃癌73.3%;PCNA:正常10.0%癌旁71.1%胃癌84.4%;CD31:正常30.0%癌旁60.0%胃癌75.6%P<0.05),随着胃腺癌恶性程度的增加MMP-9的表达逐渐增加(正常30.0%高分化腺癌70.0%中分化腺癌80.0%低分化腺癌88.0%P<0.05),且与PCNA、CD31和VEGF的表达呈正相关(P<0.05)。第二部分:体外实验中Realtime PCR结果提示,转染MMP-9 siRNA可明显降低MMP-9 mRNA的表达(F=29.58 P=0.001),Western blot和免疫组化方法和免疫荧光检测了RNAi敲低MMP-9的表达后,VEGF、PCNA、CD31、的表达明显下降(Western blot:MMP-9:对照组1.12,无意义组1.10,治疗组0.38;VEGF:对照组1.03,无意义组1.06,治疗组0.36;PCNA:对照组1.06,无意义组1.06,治疗组0.35;CD31:对照组1.12,无意义组1.09,治疗组0.34 P<0.05)。Transwell和Matrigel 3D实验结果发现,敲低MMP-9表达后SGC7901细胞的侵袭性生长受到了抑制(Transwell实验中侵袭细胞数:对照组82.1,无意义组78.36,治疗组21.97;Matrigel 3D实验中治疗后细胞直径:对照组91.65,无意义组90.93,治疗组33.81P<0.05);“划痕”法和Matrigel 2D实验发现转染后细胞的迁移能力明显下降了(“划痕”实验中迁移细胞数:对照组295.38,无意义组293.29,治疗组82.14 P<0.05);MTT试验表明敲低MMP-9表达后细胞的增殖明显受到了抑制。第三部分:体内实验中Western blot及免疫组化的结果与体外结果相类似,而且治疗组肿瘤的体积明显小于对照组和空白组,皮下肿瘤的生长曲线表明,注射MMP-9 siRNA混合物后,肿瘤的生长明显受到了抑制(治疗后肿瘤体积:对照组5016.04mm~3,无意义组4887.36mm~3,治疗组2400.08mm~3 P<0.05)。结论:1.MMP-9、VEGF、CD31、PCNA在胃腺癌中都有过表达,表明这些细胞因子参与胃腺癌的发生发展过程。其中各种蛋白的表达相互关联也验证了这一点。2.应用RNA干涉技术以oligofectamine介导转染siRNA靶向MMP-9可况默这个基因在人胃腺癌SGC7901细胞内的表达,同时抑制VEGF、CD31、PCNA的表达,从而抑制了细胞的增殖和侵袭迁移。3.裸鼠皮下胃腺癌模型应用oligofectamine介导的MMP-9治疗,同样可有效沉默MMP-9的表达,同时抑制VEGF、CD31、PCNA的表达,从而抑制胃癌的生长,侵袭和迁移,与体外试验结果一致。