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研究背景与目的:布鲁顿酪氨酸激酶（Bruton’s tyrosine kinase,BTK）是B细胞受体通路重要信号分子,参与调控B细胞的增殖、分化与凋亡,在恶性B细胞的生存及扩散中起着重要作用。BTK抑制剂是临床研究治疗B细胞肿瘤及B细胞免疫疾病的重要药物。适用于治疗慢性粒细胞白血病、急性髓细胞性白血病、成人套细胞淋巴瘤及华氏巨球蛋白血症等B细胞恶性肿瘤。目前已上市的5款BTK抑制剂,均为不可逆抑制剂,B细胞恶性肿瘤患者使用3～5年后可能产生耐药,从而不再能够起到治疗作用。对于克服不可逆BTK抑制剂耐药性和毒性的新治疗方法,临床上还存在大量未满足的需求。HBW-3-10是本实验室研发合成的二代可逆BTK抑制剂,对一代不可逆BTK抑制剂产生耐药的BTK C481S突变的激酶有良好活性而无明显的脱靶毒性,是治疗B细胞恶性肿瘤的候选化合物。为进一步探索HBW-3-10的成药性,本课题对HBW-3-10在大鼠体内的药物动力学、脑组织分布及有关物质方法学进行了初步研究。方法:1.建立并验证LC-MS/MS法测定大鼠血浆内HBW-3-10浓度。以蛋白沉淀法处理血浆样品。色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse C18（2.1mm×50mm,1.8μm）,流动相为2mM甲酸铵-乙腈,流速0.3 ml/min,梯度洗脱,柱温30℃。利用MRM模式进行定量分析,定量离子分别是m/z 539.2→377（HBW-3-10）、m/z 465.2→183（HBW-3151,内标）。大鼠经灌胃和静脉注射给药,分别于给药后5min（仅静脉）、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、10 h和24 h取血并测定血药浓度,采用DAS3.0软件计算药动学参数并绘制药-时曲线。2.开发并验证大鼠生物样品（脑组织及脑脊液）中HBW-3-10的LC-MS/MS分析方法。通过灌胃给药,分别于给药后0.25 h、1 h、2 h及4 h收集生物样品并检测HBW-3-10在上述生物样品和血浆中的药物浓度。3.建立HBW-3-10 HPLC有关物质分析方法,以ACE Excel 3 Super C18（4.6mm×150 mm,3μm）色谱柱为固定相,50 mM高氯酸钠-乙腈为流动相,流速1mL/min,柱温40℃,建立一个60 min的梯度洗脱方法。以峰面积归一化法计算杂质含量并对方法进行预验证。结果:1.成功建立并验证了测定大鼠体内HBW-3-10血药浓度的LC-MS/MS分析方法。该方法专属性、残留、线性与定量下限（LLOQ）、准确度与精密度、稀释可靠性、基质效应与提取回收率、稳定性等项目均符合体内定量分析方法验证要求。灌胃给药后,HBW-3-10在大鼠体内（0.5±0.274）h达到最大血药浓度Cmax（4344.207±1979.695）ng/mL,AUC0-t为（17905.914±9798.088）ng/mL·h,消除半衰期t1/2为（2.511±1.272）h。HBW-3-10的口服生物利用度（13.37%±7.303%）,大鼠雌雄口服生物利用度无显著性差异。2.成功建立并验证了大鼠脑组织、脑脊液中HBW-3-10药物浓度的LC-MS/MS分析方法。该方法专属性、残留、线性与LLOQ、准确度与精密度、稀释可靠性、基质效应与提取回收率、稳定性等项目均符合生物样品定量分析方法验证要求。脑组织和脑脊液检测的最大药物浓度分别是（86.339±4.516）ng/g和（51.932±51.932）ng/mL,说明HBW-3-10可通过血脑屏障和血脑脊液屏障在脑组织中分布。3.HBW-3-10略溶于乙腈,溶于甲醇,在冷藏（2～8℃）条件下样品溶液24 h内稳定性良好。空白溶液不干扰主峰、各已知杂质及降解杂质出峰,各已知杂质不干扰主峰检测,杂质之间分离良好,方法专属性良好。以供试品浓度的0.10%为杂质的限度浓度,定量限S/N约27.0,相当于杂质限度浓度的34%;检测限S/N约6.1,相当于杂质限度浓度的8.5%。同时,方法线性与范围、精密度、耐用性等均符合要求。结论:HBW-3-10在大鼠体内吸收迅速,分布较快,入血的药物浓度较大,消除较慢,在较长时间能维持高水平血药浓度,初步了解了HBW-3-10在大鼠体内药动学特征。HBW-3-10灌胃给药后能够通过血脑屏障和血脑脊液屏障,在脑组织中较长时间地保持一定浓度,有利于发挥中枢药效学作用。本研究既丰富了HBW-3-10药物动力学研究内容,也为新药开发和指导临床科学用药提供了依据。HBW-3-10有关物质方法学研究为该原料药的有关物质研究和质量标准制定提供了参考。