氧化苦参碱对骨髓来源细胞的双向调节作用

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背景:氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)是从中国传统中药苦参(Sophoraflavescens Ait.))、苦豆子(Sophora subprostrata Chun et T.Chen)的干燥根中提取出的有效成分,也是其中含量最多的成分。这两种中药在中国的使用历史已经超过数千年,古人用它煮水来作为皮肤外用药,治疗各种皮肤病。随着现代生物医学以及分析化学的发展,人们开始用另一种方法来了解中国的国粹——中医药学,随之诞生了另一种研究方法,人们开始探讨中草药中有效成分。氧化苦参碱就是苦参苦豆子的干燥根中提取出来的生物碱,也是其发挥作用的主要成分。过去的研究发现,OMT可以治疗肝炎,预防肝硬化,对各种肝炎病毒引起的肝炎都有很好的疗效。最近几年人们的研究发现,OMT还可以治疗癌症,对各种肿瘤细胞都有一定的杀伤能力。本文就基于以上几点研究,选取了慢性粒细胞白血病细胞株K562作为研究对象,研究OMT对肿瘤细胞的杀伤作用,选取正常小鼠的骨髓细胞造血干细胞和脾脏研究OMT对正常组织的影响。目的:研究OMT对慢性粒细胞白血病细胞株K562的杀伤作用,已经它对小鼠正常骨髓造血造血能力和脾脏免疫系统的影响。方法:本实验从三个方向研究了OMT作用机制,首先,细胞水平,我们采用了MTT比色法,集落形成法,以及流式细胞仪检测细胞凋亡等方法从细胞水平检测了OMT对K562细胞的杀伤作用;其次分子水平,我们采用了RT-PCR检测了端粒酶、P53、P16等与癌症发生相关的基因的表达以及细胞表面受体实验检测了OMT是否在细胞表面有受体,以及有受体细胞在细胞总数所占的百分比;动物水平实验,我们采取了小鼠皮下注射的方法给药,然后选取脾脏和骨髓来研究OMT对小鼠免疫和造血系统的影响。结果:(1)不同浓度的OMT可以抑制k562细胞增殖,促进细胞凋亡,降低K562细胞的集落形成率,且与浓度和作用时间(在72小时内)成正相关。(2)不同浓度的OMT可以减少K562细胞端粒酶基因的表达,促进抑癌基因P53和P16基因的表达。(3)不同浓度OMT对小鼠的免疫系统有不同程度的抑制作用,抑制脾细胞的非特异性免疫,促进小鼠骨髓的造血能力。结论:OMT对骨髓来源的细胞有双向的调节作用,可以抑制髓系癌症细胞的增殖,诱导肿瘤细胞发生凋亡,其作用机制有可能是上调P53、P16等抑癌基因的表达,同时下调端粒酶等原癌基因的表达,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡。其对正常小鼠的影响主要是抑制小鼠的非特异性细胞免疫,但是对正常小鼠的造血系统却又促进作用,OMT注射后于对照组相比CFU-GM增加,且差异显著。
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