目的:建立原代培养神经元的类缺血模型,观察使用促红细胞生成素(EPO)后是否具有神经保护作用,并比较不同EPO剂量组的效应,从而探讨EPO的神经保护作用。方法:取新生wistar大鼠进行原代神经元培养,在体外培养7天,倒置显微镜观察神经元形态,先进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定。然后随机分为正常对照组、直接缺血组、不同浓度EPO干预组。分别进行相应处理:正常对照组进行正常培养,不做任何处理;直接缺血组进行缺血缺氧24h;低、中、高浓度EPO干预组在缺血缺氧前24h加入对应浓度的EPO,24h后进行缺血缺氧24h。最后先倒置显微镜观察神经元形态,然后进行相应检测:MTT(四噻唑蓝)比色法检测细胞存活率;流式细胞仪检测不同组别细胞的凋亡率;乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞的活性。结果:培养出细胞后,倒置显微镜观察细胞形态,胞体增大并且具有折光性,呈典型的神经元形态,鉴定后证明培养出了可供实验用的原代神经元。缺血缺氧后细胞突起减少,细胞数减少。MTT(四噻唑蓝)比色法及乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞活性后发现组间神经元活性有统计差别(P＜0.05);其中EPO干预组的活性均分别高于直接缺血缺氧组(P＜0.05),其中1U/mlEPO组的细胞活性分别高于0.1U/ml、10U/ml组(P＜0.05)。流式细胞仪检测不同组别细胞的凋亡率发现组间神经元凋亡率有统计差别(P＜0.05);其中EPO干预组的凋亡率均分别低于直接缺血缺氧组(P＜0.05),其中1U/mlEPO组的细胞凋亡率分别低于0.1U/ml、10U/ml组(P＜0.05)。结论:本实验经MTT法、LDH法及流式法分析,实验中加入中浓度的EPO可有效的减少缺血缺氧引起的神经元损伤,降低神经元的凋亡率,从而对损伤神经元具有保护作用;低、高浓度的EPO组也有保护作用,但不及中浓度组。