目的 骨髓基质干细胞（bone marrow stem cells,BMSCs）是一种具有多向分化潜能的细胞,在特定的条件下可向成骨细胞分化,且易于获得及扩增。 生物衍生骨是天然生物组织经一系列理化方法处理而得,是理想的组织工程化骨的支架材料。 本实验基于以上考虑,旨在通过分离,扩增兔骨髓基质干细胞,定向诱导,采用检测细胞碱性磷酸酶（ALP）、Von Kossa染色等方法,研究体外培养,扩增后的成骨细胞生物学特性和成骨能力。然后将其在适当条件下,与生物衍生骨复和,培养成具有细胞生物活性的骨支架,为将来可以快速有效地修复骨缺损或重建提供坚实的物质基础。 实验方法 （一）兔BMSCs的分离培养 麻醉成功后,无菌条件下于兔近干骺端股骨干处取骨髓4毫升,置入到等体积淋巴细胞分离液中,离心,吸取界面层细胞,加入培养液,血细胞计数板计数,调整细胞浓度至1×10⁶/ml,接种于培养皿中,孵育箱中培养。换液,待细胞生长融合达80%时,消化液消化,按1:2进行细胞传代,继续培养扩增至第三代细胞。倒置相差显微镜连续观察体外培养细胞的生长、增殖和细胞形态的变化。 （二）兔BMSCs的诱导分化 第二代BMSCs以5×10⁴/ml的密度接种于10个培养皿中,加入含有地塞米松(10^-8mol/L,Sigma)、β-磷酸甘油钠（10mmol/L,Sigma）和抗坏血酸（50μg/L,Sigma）的DMEM成骨条件培养液,培养,每次换液用倒置相差显微镜连续观察细胞的生长、增殖和细胞形态的变化。