不同频率聚焦超声场下基于Span60的两种表面活性剂微气泡的生物学效应研究

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相比较于其他的各种诊断方法中,超声诊断被证实是一种安全,简单,非侵入性且费用低廉的影像技术。采用微气泡作为超声对比剂可以显著增强超声成像的效果,现在临床上已经得到广泛的应用。当然除了用于增强超声显影效果外,在外加超声场的作用下,微气泡还会与细胞发生相互作用,引发多种生物学效应,利用这些生物学效应微气泡可以用来作为药物传输系统和基因转染工具,从而提高药物传输和基因转染的效率。  在各种包膜(脂质体、聚合物、表面活性剂)微气泡中,表面活性剂微气泡的厚度是最低的,因而在超声作用下,它最容易破裂,由此可以引发较强的生物学效应,在较低强度的超声作用下,可以使周围细胞发生穿孔甚至裂解,因而有望成为新一代高效的肿瘤抑制剂。  Span60、Tween80以及PEG25S都是非离子型表面活性剂,具有很好的生物相容性,广泛用做药物辅料和食品添加剂中,本文采用超声空化法成功制备了基于表面活性剂Span60的两种微气泡,并研究了它们与SMMC-7721肝癌细胞相互作用而引发的生物学效应,具体的研究工作概述如下:  (1)两种微气泡的制备,表征。采用超声空化法成功制备了基于表面活性剂Span60的两种微气泡(Span60-Tween80以及Span60-PEG25S微气泡),采用光镜以及透射电镜对其粒径形貌进行了表征,并对其在不同条件下的稳定性进行了一定的研究。  (2)两种微气泡的细胞毒性研究,超声场下微气泡破裂对细胞凋亡,周期,蛋白等的影响。三种频率的水浸聚焦探头(0.5MHz、1MHz和3.5MHz),与功率放大器以及函数发生器连接到一起,并自制了一个高度可调的支架,另外配备了一台12V,3600rpm直流电机协助旋转样品槽,组装成微气泡与细胞相互作用系统。用CCK-8比色法检测了不同膜材以及两种不同的表面活性剂微气泡对SMMC-7721细胞的细胞生长抑制率,通过流式细胞仪研究基于声致穿孔这一基本原理在不同条件超声场下两种表面活性剂微气泡对细胞的凋亡、周期、蛋白的影响。结果发现采用的膜材以及制备的微气泡生物相容性良好,在一定的作用时间内,只加超声对SMMC-7721细胞凋亡周期以及蛋白没有影响,加入表面活性剂微气泡后细胞的凋亡急剧升高,周期变化明显,蛋白溢出增多。对于两种微气泡而言,相同条件下,它们对细胞的影响相似,表明两种表面活性剂微气泡性质类似。在相同条件下,研究两种不同频率的超声介导微气泡对细胞的影响,发现低频实验组对细胞凋亡周期及蛋白的影响更大。
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