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目的1.建立一种检测小鼠粪便胆汁酸代谢轮廓的超高液相色谱-三重四级杆飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography-triple quadrupole time-of-flight mass spectroscopy,UPLC-Triple TOF-MS/MS)方法。2.采用UPLC-Triple TOF-MS/MS方法对低脂饮食(low fat diet,LFD)组、高脂饮食肥胖抵抗(high fat diet-induced obesity resistance,DIR)组和高脂饮食肥胖(high fat diet-induced obesity,DIO)组小鼠粪便及小肠胆汁酸代谢轮廓进行分析,发现三组粪便及小肠胆汁酸代谢轮廓的差异,探索成分胆汁酸与肥胖的相关性。方法1.粪便及小肠内容物样本经固相萃取处理后,采用UPLC-Triple TOF-MS/MS法进行检测。待测物经Kinetex XB-C18反相色谱柱进行梯度洗脱分离,流动相条件:15 mmol/L乙酸铵(流动相A)和乙腈(流动相B)。通过电喷雾离子源(electrospray ionisation,ESI)负离子化,采用全扫描和子离子扫描模式获取各胆汁酸准确的一级和二级质谱数据,对其进行定性和定量分析。2.结合靶标与非靶标策略,对LFD、DIR和DIO组小鼠的粪便及小肠胆汁酸代谢轮廓进行分析。3.采用非参数检验及Spearman相关分析等统计学方法,探索成分胆汁酸与肥胖的相关性。结果1.建立UPLC-Triple TOF-MS/MS方法,可实现对小鼠粪便及小肠中40种已知胆汁酸的准确定量与22种可能胆汁酸的鉴定和半定量。2.小鼠粪便各胆汁酸线性范围为:0.125-250 nmol/mg,相关性良好(R2>0.9900),最低检测限范围为0.005-0.030 nmol/mg。该方法的日内精密度均≤16.03%,日间精密度≤20.84%,平均回收率在80.64-121.46%之间。3.LFD、DIR与DIO三组小鼠的粪便胆汁酸代谢轮廓具有一定差异,DIO组粪便总胆汁酸(total bile acids,total BAs)、总胆酸(cholic acids,CAs)、总脱氧胆酸(deoxycholic acids,DCAs)与总鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acids,CDCAs)浓度显著高于DIR组与LFD组(P<0.017);三组间小肠胆汁酸代谢轮廓具有明显差异,DIR与DIO组小肠中total BAs与牛磺结合型胆汁酸(taurine-conjugated bile acids,T-BAs)、CAs与总鼠胆酸(muricholic acids,MCAs)浓度明显高于LFD组(P<0.017),DIR组的小肠中total BAs、T-BAs、CAs与MCAs浓度明显高于DIO组(P<0.017)。4.与DIO组相比,DIR组中小肠牛磺-β-鼠胆酸(tauro-β-MCA,T-β-MCA)浓度明显升高(P<0.017),与肥胖呈负相关(r_s=-0.788,P=0.000),粪便鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)浓度明显降低(P<0.017),与肥胖呈正相关(r_s=0.536,P=0.000)。结论1.本研究建立了一种粪便胆汁酸代谢轮廓分析的UPLC-Triple TOF-MS/MS方法,方法重复性好,准确度高。2.LFD、DIO与DIR小鼠在小肠和粪便胆汁酸代谢上存在差异,小肠T-β-MCA与肥胖呈负相关,粪便CDCA与肥胖正相关。提示DIR的发生可能与胆汁酸代谢和肠道菌群的改变有关。