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第一部分CDK1158激酶活性与凋亡的研究
CDK11p58是一种在G2/M期特异性表达的蛋白激酶,在许多细胞中被证明与细胞凋亡相关,但机制仍不明确。我们实验室之前的研究证明CDK11p58能够促进放线菌酮(cycloheximide,CHX)诱导的SMMC-7721肝癌细胞的凋亡,然而其机制尚不明确。本文首次发现在SMMC-7721细胞中外转表达CDK11p58能够在CHX诱导凋亡过程中下调抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平,也下调Bcl-2的Ser70和Ser87的磷酸化水平。同时,我们也发现过表达Bcl-2能够抑制CDK11p58的促凋亡活性。进一步研究表明,CDK11p58的激酶活性在下调Bcl-2蛋白水平以及促凋亡过程中发挥关键作用。综上所述,CDK11p58在促凋亡过程中下调Bcl-2及其Ser70和Ser87磷酸化水平,并且该过程依赖于CDK11p58的蛋白激酶活性。
第二部分:SGT与PLAS1相互作用及其在凋亡中的作用
Small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein(SGT)在细胞中发挥分子伴侣蛋白的辅分子的作用,与一些重要的伴侣蛋白相互作用,例如热休克蛋白70和热休克蛋白90。我们实验室之前的研究表明SGT具有促凋亡的作用,但是其生物学机制并不清楚。为了进一步研究SGT的功能,我们采用酵母双杂交的方法,以SGT全长为诱饵筛人胎肝cDNA文库,发现了与其相互作用的蛋白PIAS1(protein inhibitor of activated STAT1),体外GST-pulldown实验也验证了它们之间的相互作用。由于SGT与PIAS1在细胞内的定位不同,PIAS1定位于胞核,而SGT一般定位于胞浆中,SGT在格尔德酶素(Geldanamycin,GA,一种热休克蛋白90的抑制剂)或凋亡信号的刺激下向核内转运,在体内试验中我们发现SGT在转运至核内后才与PIAS1发生相互作用。进一步的研究表明,采用RNA干扰的方式抑制PIAS1的表达之后,影响了SGT的促凋亡活性。通过本研究我们得出结论:SGT在一些凋亡信号的刺激下,向核内转运,通过与PIAS1相互作用促进细胞凋亡,PIAS1在SGT促凋亡的过程中发挥重要作用。