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目的：肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，具有恶性程度高、易复发转移、预后差的特点。肝细胞癌的放化疗效果欠佳，即使施行肝癌根治性切除的肝癌患者，术后3年生存率只有40-50%，其原因与肝细胞癌易侵袭转移的生物学特性有关。之前，人们认为肿瘤的生长和侵袭转移是所有肿瘤细胞共同作用的结果。经研究发现，肿瘤的生长和侵袭转移是由于其内部一部分具有干细胞特征的细胞增殖和迁移所造成的结果。这些细胞同时具有肿瘤细胞和干细胞的特征，是肿瘤形成的起始细胞。这些细胞被称为肿瘤干细胞。故肿瘤细胞易侵袭转移的生物学特性与肿瘤干细胞密切相关。肿瘤干细胞先后在白血病、乳腺癌、脑肿瘤和肺癌中已得到分离鉴定[1-2]。SuetsuguA等[3]在肝癌细胞系Huh7细胞中分离鉴定了CD133阳性的细胞具有干细胞的特征，即具有高度的成瘤性，增殖潜能及去分化性，认为此类细胞为肝癌干细胞。由于细胞自我更新能力的调节失控是肿瘤发生、发展的关键因素，因而研究调控细胞自我更新能力的基因在肿瘤细胞中的作用机制就显得尤为重要。干细胞相关基因OCT4就是这类基因之一。研究发现干细胞相关基因OCT4在肝癌组织中异常表达。有报道称OCT4可能是潜在的癌基因，对肝癌干细胞的调控起一定作用，但相关报道较少。有研究推测OCT4对肿瘤干细胞的调节可能是通过调控Wnt信号通路来实现的。本课题通过干扰基因OCT4的表达，研究肝癌HepG2细胞中干细胞相关基因OCT4与肿瘤细胞调控相关的Wnt通路的关系，通过划痕试验研究OCT4的表达对肝癌细胞迁移能力的影响。探讨OCT4对肝癌发生发展的调控机制以及对肝癌细胞生物学特性的影响，为寻求OCT4作为治疗肝癌靶点的可行性提供理论基础。方法：构建OCT4-siRNA和针对性设计的阴性对照OCT4-ncRNA（无作用），脂质体介导瞬时转染OCT4高表达细胞株HepG2细胞。实验分两组，OCT4-si组即实验组和OCT4-nc组即阴性对照组。OCT4-siRNA转染HepG2细胞24h后，通过RT-PCR方法鉴定OCT4基因沉默效率。观察OCT4-siRNA沉默人HepG2细胞中OCT4基因后，Wnt信号通路中Wnt3和β-catenin的mRNA的表达情况。通过细胞迁移实验检测OCT4基因沉默前后肝癌细胞迁移能力的变化。结果：1实验组和阴性对照组细胞OCT4mRNA表达水平分别为0.204±0.305和0.408±0.314，实验组OCT4mRNA表达水平显著低于阴性对照组（P<0.05）。2实验组和阴性对照组细胞Wnt3mRNA表达水平分别为0.243±0.003和0.337±0.025，实验组Wnt3mRNA表达水平显著低于阴性对照组（P<0.05）。3实验组和阴性对照组细胞β-catenin mRNA表达水平分别为0.629±0.041和0.876±0.039，实验组β-catenin mRNA表达水平显著低于阴性对照组（P<0.05）。4划痕实验结果显示划痕24h后，阴性对照组的细胞迁移了50.67±5.67%，而实验组的细胞仅迁移29.67±3.79%，实验组较阴性对照的迁移率明显降低，差异具有显著性（P<0.05）；48h后，阴性对照组细胞迁移了71.42±7.02%，实验组细胞迁移70.81±8.73%，实验组与阴性对照组的细胞迁移率无没明显差异，无统计学意义（P>0.05）。结论：1使用OCT4-siRNA沉默肝癌HepG2细胞中OCT4基因后，与阴性对照组相比，OCT4mRNA的表达明显下降，说明通过转染siRNA成功沉默了HepG2细胞中OCT4的表达。2沉默OCT4基因之前，肝癌细胞中OCT4mRNA高表达，Wnt3mRNA和β-catenin mRNA也高表达，说明OCT4和Wnt信号通路之间可能存在一定关系。在沉默HepG2肝癌细胞OCT4基因后，OCT4mRNA表达下降的同时，Wnt信号通路中Wnt3mRNA和β-catenin mRNA表达也明显下降，进一步说明OCT4和Wnt信号通路之间存在一定关系。提示OCT4可能是通过调控Wnt信号通路来对肝癌的发生发展起作用。3划痕试验：与阴性对照组相比，转染24h后实验组的肝癌细胞迁移率明显低于阴性对照组。说明OCT4的异常表达与肝癌细胞的侵袭转移能力有关。在转染48h后，实验组与阴性对照组肝癌细胞迁移率无差别，可能是因为siRNA已被降解，对肿瘤细胞已无作用。4根据本课题研究，说明OCT4与肝癌的侵袭转移存在一定关系，对肝癌的发生发展起重要作用，可以将OCT4作为治疗肝癌的一个靶点。