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目的肥胖是由机体能量代谢失衡引起的全球性健康问题,极大地降低了人类的生活质量和寿命。壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)是由壳聚糖水解而来的低聚寡糖,具有水溶性较好、更好的生物相容性、无毒副作用的特征,在减肥领域有着广阔的应用前景。壳聚糖酶水解法是环保而高效的获得COS的方法。然而,目前COS多由非壳聚糖酶法水解壳聚糖而来,而且目前报道的壳聚糖酶大多数稳定性和热恢复性不好,这些极大地限制了其应用。因此,寻找新的具有优良特性的壳聚糖酶并用于制备具有抗肥胖活性的COS至关重要。方法从黄海沉积物中筛选出产壳聚糖酶的海洋细菌,扩增其16S rDNA进行序列比对。在含壳聚糖的培养基中培养该菌,对产生的壳聚糖酶进行纯化,得到壳聚糖酶并对其酶学性质进行表征。研究该酶水解制备COS的最适条件,在5升发酵罐中建立了COS的制备工艺,分析COS的组成。用COS喂养高脂饮食诱导的肥胖KM小鼠,收集小鼠血清进行脂质分析,留取小鼠的肝脏和附睾脂肪进行组织切片的分析,研究COS的抗肥胖活性。结果序列的比对显示所得菌株与假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)的序列相似性最高,将该菌株命名为Pseudoalteromonas sp.SY39。纯化出的壳聚糖酶被命名为CsnM,其相对分子量大约为28 kDa。CsnM是一种冷适应的酶,在40℃时显示最高活性,在10℃和15℃时分别显示其最大活性的30.6%和49.4%。CsnM还是一种耐热酶,煮沸5、10和20 min后分别恢复其初始活性的95.2%,89.1%和88.1%。CsnM水解壳聚糖制备COS的最佳条件是:40℃,水解10小时,p H为6.0,每克壳聚糖加酶18 U。所得COS是由聚合度为2-5的寡糖组成。COS能明显减轻高脂饮食喂养的小鼠的体重、肝脏和附睾脂肪的重量,降低血清中甘油三酯和胆固醇的水平。COS降低了脂肪细胞大小,减轻了肝脂肪变性,具有肝脏保护和抗肥胖作用。结论本研究筛选出一株产壳聚糖酶的海洋细菌,对该细菌培养并纯化得到一种新的具有冷适应性和热恢复性等优良性能的壳聚糖酶CsnM。CsnM水解壳聚糖制备所得COS的聚合度为2-5,COS在小鼠实验中显示出良好的抗肥胖活性。