【摘 要】
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该试验采用肝脏原位两步胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞,灌流消化液为含0.05﹪胶原酶的PBS,pH7.6,灌流在37℃恒温下进行,流速为2-5mL/min;肝细胞按2×10个/mL接种于25mL培养瓶或培
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该试验采用肝脏原位两步胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞,灌流消化液为含0.05﹪胶原酶的PBS,pH7.6,灌流在37℃恒温下进行,流速为2-5mL/min;肝细胞按2×10<5>个/mL接种于25mL培养瓶或培养板进行平面培养,每日观察肝细胞的生长情况,并在第2、3、5、7、9、11、14、18d收集培养上清液,测定上清中的白蛋白、胆汁酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶的含量,在第2、4、6、20d抽提肝细胞RNA,采用RT-PCR方法检测肝细胞糖代谢三种关键酶的基因表达;为尼克酰胺对肝细胞增殖的影响,分别在培养液中添加高、中、低剂量的尼克酰胺,用MTT方法检测各试验组的肝细胞增殖情况.
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