【摘 要】
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目的:本研究旨在了解无镁细胞外液诱导的海马细胞癫痫模型中总dynamin 1及磷酸化dynamin 1的表达以及活动依赖的批量内吞作用(ADBE)的活动水平,在细胞层面运用dynamin 1的抑
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目的:本研究旨在了解无镁细胞外液诱导的海马细胞癫痫模型中总dynamin 1及磷酸化dynamin 1的表达以及活动依赖的批量内吞作用(ADBE)的活动水平,在细胞层面运用dynamin 1的抑制剂和激动剂观察其对癫痫细胞的总dynamin 1和磷酸化dynamin 1以及ADBE的影响。方法:用无镁细胞外液构建海马细胞癫痫模型,用Western blot技术检测癫痫细胞、正常细胞以及经dynamin 1的抑制剂(dynasore)和激动剂(PIP2)处理过的癫痫细胞的总dynamin 1以及磷酸化dynamin1水平;并用Q-PCR技术检测上述各细胞的dynamin 1的m RNA水平。运用膜片钳技术记录癫痫细胞、正常细胞以及经dynasore处理过的癫痫细胞的动作电位情况。运用活细胞荧光检测技术观察癫痫细胞、正常细胞对dextran的内吞情况以及dynasore和PIP2对其内吞的影响。结果:与正常细胞相比,癫痫细胞动作电位频率明显升高,造模成功;癫痫细胞中去磷酸化dynamin 1水平明显升高,对dextran的内吞增强;运用dynasore处理癫痫细胞后,去磷酸化dynamin 1水平降低,对dextran的内吞减少以及细胞动作电位频率下降。PIP2升高了癫痫细胞中去磷酸化dynamin 1水平,不改变细胞对dextran的内吞。结论:我们的研究发现,造模后癫痫细胞的兴奋性明显升高,癫痫细胞中去磷酸化的dynamin 1水平升高,其介导的ADBE途径也增强;运用dynasore之后,癫痫细胞的dynamin 1去磷酸化水平降低,与之相对应的ADBE途径也减弱,同时降低了癫痫细胞的动作电位频率;我们推测dynasore可抑制无镁外液诱导的癫痫细胞的兴奋性,这个抑制作用可能是通过减弱ADBE途径,从而抑制了神经递质有效传递而实现的。
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