油菜是世界上最主要的油料作物之一,也是我国主要油料作物之一,菜籽油占国产植物油总产量的47%[1,2],但我国菜籽油缺口仍然巨大,提高油菜的含油量是当前育种的主要方向之一。转录因子之间可以通过复合体形式来调控基因的表达,相关研究表明一些转录因子参与了油菜种子油脂合成过程的调控。因此,构建油菜种子中转录因子之间的相互作用网络,对于揭示油菜种子中油脂合成调控机制,为进一步通过基因工程提升油菜产油量具有重要意义。本研究通过酵母双杂与二代测序结合的技术,大规模、多重复的筛选油菜种子相关转录因子之间的相互作用。主要研究结果如下:（1）克隆了油菜种子中特异性表达及表达量较高的转录因子279个。通过参考转录组数据库和基因芯片数据库,筛选出在油菜种子中特异性表达及具有较高表达量的转录因子并按照表达量进行排序,结合本课题组用QTL定位到的与油脂合成相关的候选转录因子。利用油菜基因组数据库找出与拟南芥转录因子对应的油菜同源基因并进行聚类分析和克隆,一共克隆出279个转录因子。（2）表达文库构建及互作筛选。利用TOPO定向克隆技术将转录因子转入入门载体,成功获得168个入门载体;利用Getway技术将转录因子从入门载体分别转入AD、DB表达载体,成功获得AD表达载体127个,DB表达载体129个。经菌液PCR鉴定阳性后将AD、DB表达载体分别转入Y8800及CRY8930酵母菌株中,最终得到含105个转录因子的AD酵母文库及含116个转录因子的DB酵母文库。通过表达文库的接合作用筛选含互作对的菌株,计算互作效率,并利用二代测序分析转录因子互作对。（3）对34对互作进行初步的互作网络构建及关键转录因子分析。根据测序结果筛选出了33个转录因子的34个互作对,并根据互作结果进行了转录因子互作网络的初步构建。代谢通路分析发现,参与ABA途径的转录因子ABI5与DPBF4之间的互作,以及参与调控籽粒大小相关转录因子GIF1与FLC的互作。综上,本研究成功构建了油菜种子相关转录因子的文库及其互作网络,并通过绘制转录因子的互作网络图找出对种子大小、油脂合成、油菜抗逆性等起调控作用的相关转录因子。为提高油菜含油量、油菜抗逆性等相关研究奠定了基础。