金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus，SA）是一种重要的病原菌，能够使人和动物感染而发病。金黄色葡萄球菌在自然界分布相当广泛，在人和动物的粪便，以及在空气、水、土壤中都有该菌的存在。除能够引起人和动物的感染之外，金黄色葡萄球菌也是引起人类食物中毒的主要原因。人类的各种食品中都有该菌检出的报道，特别是在动物性食品中，该菌的污染情况更为严重，可以造成食品质量降低，严重污染时可以引起人的食物中毒。动物性食品中金黄色葡萄球菌的快速检测是减少污染、保证食品质量和安全的重要手段，常规的检测方法有细菌分离鉴定（血浆凝固酶试验、耐热核酸酶试验、甘露醇发酵试验、胶乳凝集试验）、生化鉴定、免疫学方法（酶联免疫吸附试验、对流免疫电泳）及分子生物学方法等。分子生物学方法由于操作方便快捷、特异强、对检测样品要求低等优点，近年来被广泛用于食品中金黄色葡萄球菌的检测。生鲜牛乳中微生物污染的来源主要包括患乳房炎病牛本身带菌的污染或在牛乳生产、加工过程中的污染等。乳制品均是以生鲜牛乳为加工原料的，有些地方还存在直接销售生鲜牛乳的情况，更增加了乳制品被金黄色葡萄球菌污染的机会，对消费者的健康造成威胁。金黄色葡萄球菌进入人体后，主要是吸附在胃肠道的黏膜上生成大量肠毒素，肠毒素中A型肠毒素（SEA）的致病力最强，是引起食物中毒的主要因素；耐热核酸酶（Heat-stable nuclease, NUC）是金黄色葡萄球菌的特异性酶，是该菌鉴定的重要靶标；β-内酰胺酶基因存在于对青霉素类抗生素有抗性的细菌内，对细菌性疾病的临床用药带来了困难。本研究建立了可以同时检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素基因、耐热核酸酶基因和β-内酰胺酶（β-lactamase, BLAZ）基因3个毒力基因的多重PCR检测方法，并对杨凌地区13个生鲜牛乳销售点的104份样品进行了检测，获得了以下结果：（1）成功建立了基于3个毒力基因的金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法。方法的特异性良好，NUC和SEA基因检测的敏感性均为56cfu/mL，BLAZ检测的敏感性为5.6×102cfu/mL；对牛奶中金黄色葡萄球菌的检测限量为5.6×102cfu/mL。（2）对从杨凌地区13个生鲜乳销售点采集的104份乳样的检测表明，在12份样品中检测出NUC基因，检出率为11.5%；未检出SEA基因；9份乳样中检测出BLAZ基因，检出率为8.7%；NUC和BLAZ基因同时检出的有9份，检出率为8.7%。（3）采样点⑨乳品中金黄色葡萄球菌的检出率较高，达到87.5%（7/8），采样点⑤和的检出率为25.0%（2/8），采样点⑥的检出率为12.5%（1/8），其余采样点样品中均未有金黄色葡萄球菌的检出，说明本地区市售生鲜牛乳金黄色葡萄球菌的污染状况整体上较低，但在个别养殖场从在较高的污染，可能存在奶牛的金黄色葡萄球菌的感染，需引起重视。综上所述，本研究成功建立了基于3个毒力基因的金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法，并对杨凌市售生鲜乳中金葡菌的污染状况进行了检测，为乳品安全管理提供了第一手资料。