1目的通过临床实验观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者Wnt/β-catenin信号通路、细胞因子的变化和新风胶囊(XFC)对其的影响。分析RA患者Wnt/β-catenin信号通路与其他观察指标之间的相关性,观察XFC治疗RA的临床疗效,评价XFC对所观察指标的影响,基于Wnt/β-catenin信号通路探讨RA的发病机制及XFC治疗RA的作用机制。2方法选取60例RA患者,均来自于安徽中医药大学第一附属医院风湿病科2017年11月至2018年11月期间住院患者。随机将60例RA患者分为新风胶囊治疗组(XFC组)和来氟米特对照组(LEF组),两组各30例患者,所选患者均符合2010年美国风湿病学会(ACR)和欧洲抗风湿病联盟(EULAR)提出的最新RA分类标准和评分系统。同时选取20例来自于安徽中医药大学第一附属医院体检中心的正常人作为健康对照组,记录20例患者的健康人年龄、性别和病程,选用问卷调查和量表评分,对每一位患者详细询问,记录中医症候以及生活质量,并对其评分。实验观察的指标与方法如下:(1)安全性指标:采用全自动血液分析仪,检查血常规;采用自动生化分析仪,检查肝肾功能。(2)临床指标:采用全自动生化分析仪,检测超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(CCP-AB)、(GPI)、(IgM)、(IgA)、(IgG)、(C3)和(C4)的水平;采用自动血沉分析仪,检测血沉(ESR)的水平;依据关节的症状、ESR水平、疼痛(VAS)评分,计算DAS-28评分。(3)采用ELISA方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)水平。采用WB方法检测β-连环蛋白(β-catenin)、分泌蛋白-1(DKK1)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、分泌性糖蛋白-3α(Wnt3α)、分泌性糖蛋白-5α(Wnt5α)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)蛋白的表达水平。3结果3.1 RA患者实验室指标、Wnt/β-catenin信号通路、细胞因子的变化与NC组相比,60例RA组的患者外周血中RF、ESR、hs-CRP、CCP-AB、IgG、C3和C4水平均明显升高(P<0.01)。与NC组相比,60例RA组的患者外周血中β-catenin、Wnt5α、GSK-3β、Wnt3α、MMP-13、BMP-2的表达水平均较正常组明显升高(P<0.01),而RA患者外周血中DKK1的表达水平明显降低(P<0.01)。与NC组相比,60例RA组的患者外周血中IL-1、IL-6和TNF-α表达水平均明显升高(P<0.01)。3.2 RA患者Wnt/β-catenin信号通路相关性研究3.2.1 RA患者Wnt/β-catenin信号通路指标与局部关节症状积分的相关性分析相关性分析结果显示,RA患者β-catenin表达水平与关节肿胀、关节疼痛、关节压痛、关节晨僵积分和DAS评分成正相关(P<0.05);GSK-3β表达水平与DAS评分、关节疼痛积分成正相关(P<0.05);Wnt5α表达水平与关节肿胀、关节晨僵积分成正相关(P<0.05);Wnt3α表达水平与DAS评分、关节压痛积分成正相关(P<0.05);DKK1表达水平与DAS评分、关节晨僵积分成负相关(P<0.05);BMP-2表达水平与DAS评分、关节疼痛积分成正相关(P<0.05);MMP-13表达水平与关节肿胀、关节晨僵积分和DAS评分成正相关(P<0.05)。其余信号通路指标,与局部关节症状积分,其统计学无明显差异(P>0.05)。3.2.2 RA患者Wnt/β-catenin信号通路指标与全身症状积分的相关性分析相关性分析结果显示,RA患者β-catenin表达水平与食欲减退、关节重着积分成正相关(P<0.05);GSK-3β表达水平与食欲减退、倦怠乏力、关节重着积分成正相关(P<0.05);Wnt5α表达水平与少气懒言、食后腹胀积分成正相关(P<0.05);Wnt3α表达水平与倦怠乏力积分成正相关(P<0.05);DKK1与大便稀溏、关节重着积分成负相关(P<0.05);BMP-2表达水平与食后腹胀、关节重着积分成正相关(P<0.05);MMP-13表达水平与少气懒言、关节重着积分成正相关(P<0.05)。其余信号通路指标,与全身症状积分,其统计学无明显差异(P>0.05)。3.2.3 RA患者Wnt/β-catenin信号通路指标与生活质量评分的相关性分析相关性分析结果显示,RA患者β-catenin表达水平与心理功能及HAQ评分成正相关(P<0.05);GSK-3β表达水平与生理功能及HAQ评分成正相关(P<0.05);Wnt5α表达水平与社会功能及HAQ评分成正相关(P<0.05);Wnt3α表达水平与心理功能及社会功能评分成正相关(P<0.05);BMP-2表达水平与社会功能评分及健康自我认识能力评分成正相关(P<0.05);MMP-13表达水平与社会功能评分及健康自我认识能力评分成正相关(P<0.05);DKK1与AQT、社会功能评分成负相关(P<0.05)。其余信号通路指标,与生活质量评分生活质量评分,其统计学无明显差异(P>0.05)。3.2.4 RA患者Wnt/β-catenin信号通路指标与实验室免疫炎症指标的相关性分析相关性分析结果显示,RA患者β-catenin表达水平与RF、hs-CRP、ESR、CCP成正相关(P<0.05);Wnt5α表达水平与hs-CRP、CCP成正相关(P<0.05);GSK-3β表达水平与ESR、RF成正相关(P<0.05);Wnt3α表达水平与ESR、RF、IGA成正相关(P<0.05);MMP-13表达水平与hs-CRP、ESR成正相关(P<0.05);BMP-2表达水平与CCP、ESR、hs-CRP成正相关(P<0.05);DKK1表达水平与ESR、RF、hs-CRP成负相关(P<0.05)。其余信号通路指标,与实验室指标,其统计学无明显差异(P>0.05)。3.2.5 RA患者Wnt/β-catenin信号通路指标与细胞炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的相关性分析相关性分析结果显示,RA患者β-catenin表达水平与IL-6、TNF-α成正相关(P<0.05);GSK-3β表达水平与IL-1、IL-6成正相关(P<0.05);Wnt5α表达水平与IL-6成正相关(P<0.05);Wnt3α表达水平与IL-1、TNF-α成正相关(P<0.05);BMP-2表达水平与IL-1成正相关(P<0.05);MMP-13表达水平与IL-1成正相关(P<0.05);DKK1表达水平与TNF-α成负相关(P<0.05)。其余信号通路指标,与细胞因子指标,其统计学无明显差异(P>0.05)。3.3新风胶囊治疗RA的临床疗效及机制研究3.3.1新风胶囊对RA患者临床疗效经治疗后XFC组的总有效率为90%,显效率为63.3%,有效率为26.7%,LEF组的总有效率为83.3%,显效率为43.3%,有效率为40%,相较于LEF组,XFC组的总有效率与LEF组相当,显效率更高(P<0.05)。3.3.2新风胶囊对RA患者中医症候的影响与治疗前相比较,两组治疗后关节疼痛、关节肿胀、关节压痛、晨僵、食欲减退、少气懒言、倦怠乏力、食后腹胀、大便稀溏、关节重着积分水平均明显下降(P<0.01)。与LEF组治疗后相比较,XFC组食欲减退、少气懒言、倦怠乏力、关节重着积分水平下降更明显(P<0.01),关节疼痛、关节压痛、晨僵积分水平也有明显下降(P<0.05)。3.3.3新风胶囊对RA患者生活质量的影响与治疗前相比较,两组治疗后AQT、生理功能、社会功能、心理功能、健康自我认识、HAQ评分水平均明显下降(P<0.01)。与LEF组治疗后相比较,XFC组AQT、HAQ评分水平下降更明显(P<0.01),社会功能评分水平也有明显下降(P<0.05)。3.3.4新风胶囊对RA患者实验室指标的影响与治疗前相比较,XFC组治疗后RF、CCP-AB、GPI、C3、hs-CRP、ESR水平及DAS-28评分均明显下降(P<0.01),C4水平也有所下降(P<0.05);LEF组治疗后CCP-AB、IgG、IGA、C3、hs-CRP、ESR水平及DAS-28评分均明显下降(P<0.01),RF水平也有所下降(P<0.05)。与LEF组治疗后相比较,XFC组RF、CCP-AB、hs-CRP、ESR水平及DAS-28评分下降更明显(P<0.05)。3.3.5新风胶囊对RA患者Wnt/β-catenin信号通路指标水平变化的影响与治疗前相比较,XFC组治疗后β-catenin、Wnt3α、Wnt5α、GSK-3β、BMP-2、MMP-13的表达水平均明显下降(P<0.01),DKK1表达水平明显上升(P<0.01);LEF组治疗后β-catenin、GSK-3β、MMP-13、Wnt3α的表达水平均明显下降(P<0.01),DKK1表达水平均明显上升(P<0.01)。与LEF组治疗后相比较,XFC组β-catenin、GSK-3β、Wnt5α、MMP-13、BMP-2的表达水平下降更明显(P<0.05),DKK1表达水平上升更明显(P<0.05)。3.3.6新风胶囊对RA患者外周炎症因子水平的影响与治疗前相比较,两组治疗后IL-1、IL-6、TNF-α的表达水平均明显下降(P<0.01)。与LEF组治疗后相比较,XFC组IL-6、TNF-α的表达水平下降更明显(P<0.05)。4结论4.1 RA患者外周血清中β-catenin、GSK-3β、Wnt3α、Wnt5α、BMP-2、MMP-13表达水平均上升明显,DKK1表达水平明显下降,提示Wnt/β-catenin处于异常激活状态,说明RA患者的骨破坏可能与Wnt/β-catenin处于异常活化有关。4.2 RA患者体内的促炎细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α表达水平上升,RF、CCP-AB、C3、C4、ESR和hs-CRP水平的上升,DAS-28评分、中医症候积分、生活质量评分的上升,与β-catenin、GSK-3β、Wnt3α、Wnt5α、BMP-2、MMP-13成正相关性,与DKK1成负相关性。4.3 XFC治疗RA的临床疗效明显,显效率优于LEF,可以有效降低RF、CCP-AB、C3、ESR、hs-CRP、DAS-28评分、中医症候积分、生活质量评分,可以有效的下调IL-1、IL-6和TNF-α表达水平,抑制机体的炎症反应。4.4 XFC改善RA患者病情的机制可能是通过下调β-catenin、GSK-3β、Wnt3α、Wnt5α、BMP-2、MMP-13蛋白的表达水平,提高DKK1蛋白表达水平,抑制Wnt/β-catenin信号通路的过度活化,下调了IL-1、IL-6和TNF-α等促炎因子的表达水平,抑制机体的自身免疫炎症反应,抑制了骨破坏的进展,从而控制了RA的病情进展,降低了其对靶器官的损害。