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在神经元发育过程中,神经元限制性沉默因子（NRSF）和抑制元素1沉默转录因子（REST）对基因表达的转录起着非常重要的负调控作用,它们共称为NRSF/REST蛋白,属于Kr（u|¨）ppel型锌指蛋白,通过结合基因中序列保守的神经限制性沉默元件NRSE/RE1 dsDNA片断达到在转录水平上抑制与神经元发育及功能相关的基因在非神经元细胞中表达。最近报道非编码的小NRSE/RE1 dsRNA通过调节NRST/REST与NRSE/RE1 dsDNA作用能使干细胞中处于抑制状态的神经元特异性基因在早期神经元中呈激活状态,但具体激活机制尚不清楚。研究表明,NRSF/REST的C端抑制结构域的C2H2型锌指结构域（ZF9）能与共抑制蛋CoREST的SANT结构域相互作用,从而增强NRSF/REST负调控功能。为了将来研究非编码的dsRNA激活特异性神经元基因发育机制,本文主要探讨SANT结构域与ZF9、NRSE/RE1 dsDNA相互作用是否受到NRSE/RE1 dsRNA的干扰,工作分为如下两部分:第一部分,SANT1结构域质粒构建和表达条件优化。利用基因工程手段构建了pSJ3 SANT1（含8×His·tag）、pSMT3 SANT1（含SUMO·tag和FLAG·tag）和pHGBSANT1（含GB·tag和His·tag）3个载体,转入大肠杆菌BL21（DE3）中表达。通过优化诱导温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间等条件,发现pHGB CoREST SANT1在上清中有少量表达。第二部分,探讨SANT2结构域与NRSE/RE1 dsDNA、NRSE/RE1 dsRNA以及NRSF/REST ZF9之间的可能的相互作用模式。利用SANT2结构域表达载体,优化其在M9培养基中表达和纯化条件,获得15N标记的SANT2结构域。采集自由态的SANT2、复合态SANT2（与NRSF/RESTZF9、NRSE/RE1 dsDNA、NRSE/RE1dsRNA之间复合物）二维1H-15N HSQC图谱,分析表明dsRNA、ZF9具有几乎相同的结合位点,dsDNA与SANT2作用导致其多聚化。这说明dsRNA可能通过阻碍ZF9与RE1 dsDNA、SANT2结构域相互作用而达到激活功能。