飞扬草质量评价及乌头类药材及其制剂毒性评价研究

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乌头属植物分布广泛,很多植物都有一定的药用价值,其中乌头AconitumcarmichaeliDebx.(中药名:川乌)和北乌头AcontitumkusnezoffiiReichb.(中药名:草乌)记载于《中国药典》。市场上90%以上的乌头类产品都来自这两种植物。传统上乌头类药材在口服前必需通过加热或蒸煮的方法来减毒,在这个过程中,川乌和草乌中主要的毒性成分双酯型二萜生物碱如乌头碱、新乌头碱、次乌头碱会分解成毒性较低的单酯型二萜生物碱如苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱。双酯型二萜生物碱含量一旦降低,药物的毒性会显著降低。目前,这6个常见的乌头生物碱常作为乌头类药材质量控制的化学指标。国家食品药品监督管理局明确规定:只有经过加工、去毒的乌头属植物的根茎及根才能在市场上销售。然而,每年在全国各地还是常有乌头类药材中毒或误用含乌头类药材中毒事件的报道。  滇乌碱是毒性乌头碱之一,其毒性和乌头碱类似。尽管滇乌碱是从乌头属的特定植物诸如黄草乌AconitumvilmorinianumKom.、瓜叶乌头AconitumhemsleyanumPritz.、宣威乌头AconitumnagarumStapf.var.lasiandrumW.T.Wang中分离得到,但它在乌头属植物中的分布和含量还未见有研究报道。此外,滇乌碱常在乌头中毒案例的尿液样品中检测到,但在己报道的乌头中毒事件中,滇乌碱的植物来源并不明确,所以滇乌碱又被称为隐性中毒成分。因此,有必要研究开发一种灵敏、快速的高通量筛选方法来监控和检测乌头类药材和中成药中的滇乌碱和其他相关的毒性乌头生物碱。  本文首次运用UPLC-ESI-MS/MS方法结合微波辅助提取技术用来同时测定样品中滇乌碱和6个相关的毒性乌头生物碱的含量,样品包括乌头类药材生品、炮制品及含乌头类药材的中成药等。优化的方法对测定的生物碱具有良好的线性、精密度、重现性、稳定性和加样回收率。从检测结果看,滇乌碱在样品中检测到的含量范围从0.015mg/g到10.41mg/g。此结果为首次在川乌、草乌及中成药中检测到滇乌碱成分。新建立的方法能够快速检测滇乌碱及其相关乌头类生物碱,研究结果提示,为了确保安全用药,应该将滇乌碱也作为乌头类药材及其中成药质量控制的化学指标之一;在此基础上,借鉴了评价环境中毒性物质的研究方法,首次将化学和毒理学参数结合,综合评价乌头类药材和相关中成药的毒性,以建立既能保证该类药材的有效性和稳定性,又能较好地反映其安全性的评价方法。新建立的方法可以为中药药检等相关机构提供对乌头类药材进行日常毒性评价和毒性监控。  飞扬草EuphorbiahirtaL.是大戟科一年生草本植物,广泛分布于我国广西、福建、广东、江西、湖南、四川等省区以及其它热带和亚热带国家。研究发现飞扬草中的化学成分主要有黄酮类、鞣质类、萜类、糖苷类和挥发油类等成分。目前,药理活性的报道主要集中在对飞扬草提取部位药理活性的研究上,尤其是对其抗菌活性的研究较多,但具体活性如何,是否有潜力成为抗菌药物,需要实验进一步验证。  飞扬草有小毒,但其毒性成分还未见报道。此外,《中华人民共和国药典》从1977年版到2010年版也仅增加了薄层色谱鉴别项,目前还缺乏关于飞扬草质量控制的有效方法,因此为了临床用药的安全、有效,有必要对其现行的质量标准优化和提升,为合理、安全地应用飞扬草提供更加可靠、科学的研究方法。  首次建立了以活性成分之一的槲皮苷作为标记物的质量标准,经优化后的质量控制方法具有简便、快速、灵敏和适用性较强的优点。此外,为了评价和证实飞扬草是否具有抗菌和抗肿瘤作用,还进一步研究了飞扬草不同提取部位的抗菌活性以及对HepG2细胞增殖的抑制作用。结果表明,飞扬草的环己烷和二氯甲烷低极性提取物对HepG2细胞增殖有一定的抑制作用,但其所有提取部位的抗菌活性与氧氟沙星比较,活性较弱。
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