夜香树提取物Nocturnoside B体内外抗肝癌作用及机制研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghuia23
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目的:探讨夜香树提取物Nocturnoside B体外对人肝癌细胞BEL-7404以及体内对人肝癌细胞BEL-7404荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用及其机制。  方法:(1)用MTT检测不同浓度的Nocturnoside B对人肝癌细胞BEL-7404的增值的影响,观察细胞生长状态和形态学,平板集落形成试验检测Nocturnoside B对细胞集落形成的影响,Hoechst染色,检测Caspase3酶活性,用流式细胞仪(FCM)PI染色检测细胞周期变化,单细胞凝胶电泳检测药物对肿瘤BEL-7404细胞DNA的损伤,瑞氏染色。(2)选用人肝癌细胞BEL-7404建立荷瘤裸鼠,肿瘤长到0.2~0.4 cm后将荷瘤裸鼠随机分为5组,生理盐水组、顺铂组和Nocturnoside B高﹑中﹑低组,剂量分别为6、4、2mg/kg。治疗期间测量皮下移植瘤的长径和短径;20d后眼眶取血并处死裸鼠,取瘤块制成蜡块,进行常规病理切片;酶联免疫吸附法测定裸鼠血清中 I L-8浓度,采用常规HE染色、免疫组化DAB染色观察瘤组织微血管密度的形成与血管内皮生长因子,增值细胞核抗原(PCNA)和Ki-67。  结果:(1)MTT结果显示,Nocturnoside B对人肝癌细胞BEL-7404的增殖具有显著的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性关系。其48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为15.92μg/ml和8.86μg/ml。顺铂组的增殖亦存在抑制作用; Nocturnoside B处理后的 BEL-7404细胞失去正常结构,形态变圆,体积缩小,有部分细胞的染色质浓缩,细胞核碎裂形成典型的凋亡小体。随着药物浓度的增大及作用时间的延长,活细胞数量明显减少,培养基中可见大量细胞碎片;平板细胞集落形成受到抑制;Hoechst染色后有的细胞核呈致密浓染,碎块状致密浓染,颜色有些发白发亮;检测到Caspase3酶活性明显增加;PI法检测到G0/G1和G2/M期细胞数增,S期减少;单细胞凝胶电泳检测到“彗星”细胞出现的频率升高,“彗星”尾长度增加且形状变大。(2)Nocturnoside B高、中、低剂量组肝癌裸鼠肿瘤的相对增值率为38.86%、42.94%、48.26%。镜下发现, Nocturnoside B高剂量组部分肿瘤细胞体积变小,细胞核浓染,肿瘤组织坏死严重。与生理盐水组相比较,Nocturnoside B高剂量组能明显降低血清中白细胞介素-8的含量(P<0.01);降低裸鼠肿瘤组织中微血管密度和血管内皮生长因子的含量(P<0.05);裸鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原PCNA和Ki-67的含量也明显下降(P<0.05)。  结论:(1)Nocturnoside B在体外能够显著抑制人肝癌细胞BEL-7404,阻滞肿瘤细胞的G2/M期,剂量依赖性地引起BEL-7404细胞DNA双链断裂,对DNA造成损伤,诱导 BEL-7404细胞凋亡。(2)Nocturnoside B对人肝癌BEL-7404细胞裸鼠皮下移植瘤的生长具有显著的抑制作用,可能通过降低血清中白细胞介素-8、微血管密度和血管内皮生长因子、增殖细胞核抗原PCNA和Ki-67,最终抑制肿瘤的生长。
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