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目的:揭示HGF与VECs凋亡途径的内在联系,探讨HGF抑制闭合性周围血管损伤中VECs凋亡,促进其修复和再生的应用价值,为进一步探索闭合性血管损伤的治疗提供新的方向。方法:本课题拟采用腔内介入法建立闭合性周围血管损伤动物实验模型,用TUNNEL法检测动物模型VECs凋亡指数,评估模型可靠性。选择慢病毒作为载体介导HGF基因转染新西兰家兔VECs,构建Lv-GFP(携带绿色荧光蛋白的重组慢病毒,用于测定转染率)和GFP-Lv-HGF(携带肝细胞生长因子基因和绿色荧光蛋白的重组慢病毒)两种内皮细胞系,成功转染后用荧光显微镜观察转染细胞中GFP的表达情况,评估转染有效性。45只新西兰雌性家兔分为:A组:股动脉损伤+GFP-Lv-HGF处理组15只;B组:股动脉损伤+Lv-GFP处理组15只;C组:正常空白对照组15只。显露A、B组损伤段股动脉,用毛细针头将体外实验HGF基因转染成功的VECs注入动脉壁下及血管周围组织间隙内,分别于注射术后第1、3、5天每组分别取5只处死,分离出手术段股动脉。使用western blot及免疫荧光方法检测bax蛋白、caspase 3、8、9,Ask1、JNK等凋亡相关蛋白表达情况。结果:利用血管腔内介入法可以建立可靠的兔股动脉内膜损伤模型,并为体内外实验提供了转染细胞;HGF表达可以下调凋亡相关蛋白caspase3、caspase8、caspase9的表达,上调Bcl-2,Bcl-xl表达水平;HGF表达上调可以抑制Fas/Fas L表达,从而抑制Fas/FasL级联通路的激活,显著降低VECs凋亡,促进VECs增殖。此外,HGF还能抑制ASK1-JNK介导的凋亡信号转导通路进而促进VECs增殖。结论:本实验证实HGF通过调控Fas/FasL级联信号通路参与抑制VECs凋亡,促进外周血管新生,为进一步探索闭合性周围血管损伤的治疗提供新的方向。