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睾丸特异性蛋白50(Testes-specific protease 50,TSP50)是一种特殊类型的苏氨酸蛋白酶。研究发现,TSP50的表达具有组织特异性:它在睾丸组织中高表达,在其它正常组织中不表达或者少量表达,但在多种乳腺癌组织中TSP50大量表达。此外,有研究发现,在TSP50高表达的P19细胞中,抑制TSP50表达能够抑制细胞增殖和细胞迁移,并诱导细胞凋亡。这些研究表明,TSP50在肿瘤的发生发展中具有重要作用,它有潜力成为肿瘤诊断及治疗的理想靶点,因此对其表达调控的研究具有重要意义。miRNA是一种长度为22个核苷酸左右的具有转录后调控功能的非编码RNA分子。研究表明miRNA能够调控肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭以及代谢相关基因的表达。本文对靶向TSP50 mRNA 3’UTR的miRNA进行了筛选,并研究了它们对TSP50高表达肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。本文首先筛选了靶向TSP50的miRNA,得到miR-937-5p、miR-2052、miR-1264以及miR-4709-3p四种潜在的与TSP50 mRNA 3’UTR结合的miRNAs,并利用表达TSP50基因3’UTR的重组质粒pGL-3-TSP50-3’UTR验证了四种miRNAs的作用。随后我们选择了内源性高表达TSP50的A2780细胞,转染所筛选miRNAs的模拟物(mimics),通过Western Blot和qRT-PCR实验检测他们对TSP50表达的影响。结果显示,这四种miRNAs能够一定程度上降低A2780细胞中TSP50的表达水平。研究表明,TSP50能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭。为了检验miRNA对TSP50促肿瘤作用的影响,我们将四种miRNAs的mimics转入高表达TSP50的A2780细胞中,检测肿瘤细胞相关特征的变化,以TSP50表达量很低的肿瘤细胞Hela细胞为对照组。MTT结果显示,转染miRNAs后A2780细胞的细胞活力受到抑制,而Hela细胞的细胞活力未受到显著影响。BrdU掺入实验结果显示,miRNAs抑制了A2780细胞的DNA合成,但对Hela细胞无显著作用,这两个结果提示,miR-937-5p、mi R-2052、miR-1264以及miR-4709-3p能够通过抑制TSP50表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖能力。伤口愈合实验结果显示,转染了miRNAs的A2780细胞的划痕愈合速度明显减慢,而Hela细胞则无明显变化;transwell结果显示,A2780细胞在转染了miRNAs后穿过基质胶的细胞数量减少,而Hela细胞则无明显变化,这些结果表明,上述四种miRNAs能够通过抑制TSP50表达对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力产生一定的抑制作用。综上所述,本文筛选得到了以TSP50 mRNA 3’UTR为靶标的四种miRNAs,并检测了它们对TSP50高表达肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。本文为深入研究miRNAs在TSP50促进肿瘤发生发展中的作用奠定了前期工作基础,同时也为以TSP50为靶点的肿瘤治疗提供了新的途径。