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目的:探讨低分子肝素(LMWH)在孕期对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病理改变和病毒DNA载量的影响。以确定LMWH抗HCMV先天性感染的合适剂量。
方法:取健康纯系清洁级Balb／c小鼠48只,10周龄,体重量22～30 g。随机选择配对,每对雌雄鼠各1只。实验组20对,正常对照组4对。实验组每4对为1组,每只分别于腹腔内注射6.0logTCID50(半数组织培养感染剂量,又称50％组织细胞感染量)HCMV AD169接种至雌雄小鼠腹腔。正常对照组4对,每只于腹腔内注射相应细胞维持液DMEM0.5 ml。所有小鼠于接种后配对,隔离喂养,并观察受精情况,记录受精时间。发现妊娠后,分别给予实验Ⅰ组皮下注射LMWH1000U／kg、Ⅱ组皮下注射LMWH500U／kg、Ⅲ组皮下注射LMWH250U／kg和Ⅳ组肌肉注射更昔洛韦60mg／kg各10天；Ⅴ组为阳性对照组孕鼠不注射低分子肝素或更昔洛韦。每组随机取10只新生鼠,生产后1天处死新生鼠,取出新生鼠肝脏,进行病理学检查和荧光定量-PCR检测(FQ-PCR)。
结果:1)LMWH1000u／kg(Ⅰ)组肝组织病理损害较阳性对照组明显减轻,HCMV DNA载量为1.60×103copies／50mg较阳性对照组为5.91×107copies／50mg显著性降低(P<0.01)；与更昔洛韦治疗(Ⅳ)组1.75×103copies／50mg组相比差异无显著性(P>0.05)。2)LMWH500U／kg(Ⅱ)组肝组织炎症变化较阳性对照组稍减轻,而LMWH250U／kg(Ⅲ)组肝组织较阳性对照组的炎症反应无明显变化,LMWH250U／kg(Ⅲ)组HCMV DNA载量为5.49x107与阳性对照组比较无显著性差异(P>0.05)。
结论:在 HCMV AD169株先天性感染Balb／c新生鼠肝细胞后。LMWH1000U／kg在孕期干预能够显著性降低其肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎症反应。为低分子肝素成为新的抗HCMV先天性感染的抗病毒药的筛选提供了理论基础。
第二部分
目的:研究低分子肝素(LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病毒学和病理学方面影响。探讨LMWH在孕期和生后不同的时期抗HCMV先天性感染鼠肝细胞的效果如何。
方法:取健康纯系清洁级Balb／c鼠60只,10周龄,雌雄各半,随机分为5组,每组6对,设实验组3组、阳性对照组和空白对照组。实验组和阳性对照腹腔接种6.0logTCID50HCMV AD169,空白对照组腹腔注射DMEM0.5ml／只,然后交配。实验Ⅰ组的雌鼠在孕期给予皮下注射LMWH1000U／kg10天；Ⅱ组的雌鼠在孕期给予皮下注射LMWH1000U／kg5天,待生产后再给新生鼠皮下注射LMWH1000U／kg5天,Ⅲ组在生产后予新生鼠皮下注射LMWH1000U／kg10天。待生产后10天处死新生鼠,取出新生鼠肝脏,进行病毒分离、干湿重测定、病理学检查和荧光定量-PCR检测。
结果:1)在阳性对照组新生鼠的肝组织匀浆上清液中10天左右分离出HCMV,而LMWH干预的3组新生鼠的肝组织匀浆上清液中24天左右分离出HCMV；在病毒分离出现典型细胞病变效应(CPE)的细胞培养液中检测出HCMV DNA。2)病理学证实阳性对照组肝组织有炎性改变,肝细胞浊肿变性、空泡变性,核内有特异性HCMV包涵体,部分肝细胞呈坏死表现,而LMWH干预组病理结果表明肝组织仅有轻度炎性改变和肝细胞浊肿变性,甚或炎症改变不明显。3)LMWH干预组肝组织含水量较阳性对照组明显降低。4)HCMV DNA载量LMWH干预的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别为3.34×103copies／50mg、3.16×103copies／50mg和4.55×103copies／50mg较阳性对照组5.48×107copies／50mg显著性降低(p<0.01)；LMWH干预组间相比差异无显著性(p>0.05)。
结论:在HCMV AD169株先天性感染Balb／c胎鼠和新生鼠肝细胞后,用LMWH在宫内和出生后干预能够显著性降低肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎症反应,肝组织病理改变明显改善。本实验为低分子肝素作为抗病毒的药物的临床筛选提供了可能。