IGF2BP3(胰岛素样生长因子2 m RNA结合蛋白3)是IGF2BPs(胰岛素样生长因子2 m RNA结合蛋白)家族成员,通过结合目标m RNA编码区来调节m RNA的转录、翻译。在细胞极化、运动、形态发生、新陈代谢、增殖及分化等过程中发挥重要作用。现有的研究表明,该基因在鱼类和哺乳动物中高度保守,在人类胎盘、成人生殖器官以及成年小鼠的生殖器官中高表达,但具体作用机制尚不清楚,暗示该基因在胚胎早期发育及性腺发育中可能具有重要作用。斑马鱼胚胎发育过程中由于胚胎透明的特性,可以利用显微镜等对胚胎早期发育过程进行清晰的视觉跟踪分析,并且由于斑马鱼一次可排卵几百颗,繁殖力强以及生长发育时间较小鼠等其他模式动物较短成为第三大类模式生物。igf2bp3位于斑马鱼19号染色体,编码582个氨基酸,由两个RRM(RNA Recognition Motifs)结构域和四个KH(hn RNPK Homology)结构域构成。本实验利用CRISPR/Cas9技术构建igf2bp3基因缺失的斑马鱼突变体。通过NBCI获得斑马鱼igf2bp3基因序列,设计两个靶点,经过体外转录,将合成的两个sg RNA与Cas9 m RNA一起显微注射至斑马鱼胚胎的单细胞期。通过PCR扩增及Sanger测序检测,获得F0代嵌合体。将饲养至性成熟的阳性个体(F0)与野生型(WT)斑马鱼杂交得到F1代杂合子。通过F1代性成熟的杂合子斑马鱼内交,得到纯合子、杂合子、野生型的比例符合孟德尔遗传定率约1:2:1。通过Sanger测序与野生型斑马鱼进行序列比对,表明成功得到缺失1513bp且稳定遗传的igf2bp3基因敲除斑马鱼突变体。对F2代斑马鱼突变体进行计数统计观察,igf2bp3基因缺失的纯合子斑马鱼和野生型斑马鱼比较表现出更多的雄性,纯合子雌性斑马鱼和雄性斑马鱼比例约为1:10。同时通过Trizol法提取90天野生型斑马鱼卵巢、肌肉、鳃、肾、脑、精巢、心脏、脾、眼睛、肠、肝脏等不同组织的总RNA进行荧光定量检测。实验结果显示在野生型斑马鱼中igf2bp3基因在卵巢中的表达量最高,表明igf2bp3基因在斑马鱼性腺发育中发挥一定的作用。斑马鱼由于缺乏性染色体,其性别决定机制尚不明确,igf2bp3基因缺失的纯和斑马鱼突变体为研究性别分化提供了可能。同时通过提取0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h野生型斑马鱼胚胎的总RNA,以c DNA为模板进行PCR扩增,均可检测到该基因的表达,表明igf2bp3为母源性基因,可能在维持母体m RNA的稳定性发挥功能。同时为研究igf2bp3基因在斑马鱼早期胚胎发育鉴定了基础。