【摘 要】
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严重感染嗜肺型军团菌(Legionella pneumophila)后,可能会发展成军团菌病(Legionnaires’disease)。在嗜肺型军团菌通过内吞作用进入宿主细胞后,利用自身Icm/DotⅣ型分泌系统
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严重感染嗜肺型军团菌(Legionella pneumophila)后,可能会发展成军团菌病(Legionnaires’disease)。在嗜肺型军团菌通过内吞作用进入宿主细胞后,利用自身Icm/DotⅣ型分泌系统分泌RidL效应蛋白分子。RidL定位于LCV囊泡膜上,通过与逆向运输复合物(Retromer complex)中的Vps29亚基相互作用,改变逆向运输复合物的功能,从而影响宿主的逆向膜泡运输通路,进而利于细菌在LCV中繁殖。然而RidL和Vps29详细的相互作用方式以及RidL的调节机理都不清楚。为了回答上述问题,本文利用大肠杆菌表达系统,表达RidL(183-734)一段截短序列。经过多个纯化步骤,包括亲和纯化、离子交换层析、分子筛层析等,得到纯度较高、性质稳定、均一且适合进行晶体学研究的蛋白样品,最终浓缩到20mg/ml。经过初步筛选、后续优化等多步探索和尝试,本文得到了RidL(183-734)单个蛋白的晶体,经过X衍射处理,native晶体可以得到分辨率达2.7A的数据。用代谢缺陷型菌株B834,我们表达并纯化得到了RidL(183-734)硒代衍生物的蛋白,并优化得到其晶体,其X衍射分辨率可达3.5A。native和硒代衍生物晶体经初步晶体学分析可确定其空间群为C2。晶胞参数为：a, b, c (A):259.64,78.394,70.07; α,β,γ(°):90.00,91.49,90.00。本文用分子、生化、结构等方法,首次得到RidL晶体学数据,探索了一系列对RidL结晶的方法。本文的研究有助于进一步解析RidL的晶体学研究和阐明其发挥功能的分子机制。
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