猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)主要引起幼龄仔猪腹泻、呕吐、脱水和死亡,死亡率高达100%,给养猪业带来重大经济损失。尽管目前已经有防控PEDV的疫苗,但是由于预防接种的盲目性,导致免疫失败的现象在很多猪场出现,仍有猪场发生PEDV引起的仔猪腹泻并导致经济损失。为克服接种疫苗的盲目性,有必要建立评价母源抗体水平的诊断方法。此外,建立快速诊断PEDV的试纸条可以第一时间内确诊仔猪腹泻是否由PEDV引起,以便对猪群进行紧急接种以达到控制PEDV流行的效果。在确诊PEDV感染的情况下,猪群由紧急接种到产生抗体至少需要7天时间,有必要研制治疗PEDV的抗体类药物,对已发病猪群进行治疗来降低经济损失。分泌性IgA(Secretory IgA,SIgA)抗体为黏膜免疫系统中重要的效应分子,为检测PEDV特异性SIgA抗体,本研究以纯化的PEDV粒子为包被抗原,以待检初乳或直肠拭子为检测样品,以辣根过氧化物酶标记的鼠抗猪SIgA分泌成分(Secretory component,SC)的抗体为酶标二抗,建立了检测初乳和肠道黏膜中的PEDV SIgA间接ELISA方法。并对该方法进行了特异性、重复性和敏感性实验。该方法与TGEV、PoRV阳性初乳无交叉反应,经间接免疫荧光(IFA)标定,当初乳中抗体效价在1:200到1:6400之间时,该ELISA的敏感性较好;批内和批间实验表明重复性较好。该方法的建立为研究猪群感染PEDV和PEDV疫苗免疫后特异性SIgA水平及黏膜免疫评价提供了有效的技术手段,为选择合适的预防接种时间提供了技术支持。为快速确诊仔猪腹泻是由PEDV引起的,以纯化的抗PEDVN蛋白的15B12单抗和兔IgG抗体用含有铕(Eu)元素的荧光纳米微球进行标记,将其用喷金仪喷于结合垫上;以抗PEDVN蛋白的4H7单抗作为捕获抗体用喷膜机喷涂在硝酸纤维膜(NC)上形成检测线T;将羊抗兔IgG抗体用喷膜机喷涂在NC形成质控线C线,组成检测PEDV的荧光快速检测试纸条。用荧光检测仪分别采集T线处荧光峰值(HT)和C线的荧光峰值(HC),并计算HT/HC的比值,根据比值确定检测结果。当检测值大于0.05时,表明该样品含有PEDVN蛋白或PEDV。用该试纸条检测TGEV、PoRV等其它病毒时均呈阴性反应,敏感性试验结果表明,该PEDV荧光检测试纸条的灵敏度要高于RT-PCR的灵敏度。研制的试纸条为快速确诊PEDV提供了技术手段。为筛选具备中和PEDV的单克隆抗体,以纯化的PEDV流行毒株LNCT2的病毒粒子为抗原,免疫BALB/c小鼠,经融合后筛选获得1株稳定分泌抗PEDV的杂交瘤细胞株,命名为1B9。病毒中和实验表明,该单抗能够有效中和PEDV-LNCT2、PEDV-LNSY和PEDV-Hjms等G2基因亚型毒株,使其失去感染细胞的能力,但不能中和CV777毒株(G1基因亚型)。为阐明1B9单抗中和病毒的分子机制,本研究用抗PEDV多克隆抗体(pAb)和1B9单抗筛选PEDV LNCT2的突变毒株。经过连续30代次中和试验,成功筛选到1B9单抗的逃逸毒株,命名为Mutant-1B9,但该逃逸毒株仍然被PEDV的pAb中和。序列分析发现,在突变毒株的s基因中缺失了两个区域:55IGENQ59和609F,使得Mutant-1B9能够逃避1B9单抗的中和作用。上述结果表明,缺失的氨基酸参与了构象表位的形成,为构象表位的定位提供了有价值的信息。推测中和抗体通过结合上述位置影响病毒与受体的结合而发挥中和作用。此外,没有筛选出PEDV多抗的逃逸毒株。这表明pAbs或基于多个单克隆抗体的联合疗法在控制PEDV感染方面的具有潜在效用。综上所述,本研究建立了检测PEDV特异性SIgA的ELISA方法;建立了检测PEDV抗原的荧光快速检测试纸条;筛选到一株具备中和PEDV的中和性单克隆抗体,该抗体识别的表位为构象表位,其中55IGENQ59和609F位为抗体结合的关键氨基酸位点,中和抗体通过结合这些位置后影响病毒与受体的结合而发挥中和作用。上述研究结果为防控PEDV提供了重要的技术手段和理论支持,具有广阔的应用前景及研究意义。