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小麦(Triticum aestivum L.)是世界上重要的粮食作物之一。而黑麦(S. cerealeL.)是改良小麦抗病性和产量等性状的重要基因源,故应对黑麦各染色体进行更深入的研究。本实验主要采用非变性荧光原位杂交(ND-FISH)的方法对小麦-黑麦杂交后代进行鉴定,同时利用SLAF-seq技术获得黑麦4R染色体特异序列。借助小麦-黑麦附加系、4R染色体易位变异系,开发基于PCR的4R染色体特异分子标记,并将这些特异标记定位到4R染色体不同区段,具体研究结果如下：1、利用寡核苷酸探针,鉴定了来自普通小麦绵阳11 (Triticum aestivum L.) (MY11)×黑麦Kustro (Secale cereale L.)的小麦-黑麦4R二体附加系DA4RKu、4RL双端体附加系DTA4RLKu和4RS双端体附加系DTA4RSKu。并且利用探针(AAC)6. Oligo-pScl 19.2-1、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250,将4R染色体区分为9个区段,分别命名为S-1、S-2、S-3、S-4、L-1、L-2、L-3、L-4和L-5。2、利用寡核苷酸探针,鉴定4RS-5DS.5DL、5DS-4RS.4RL易位系12FT2115的后代以及DTA4RLKu和12FT2115的部分辐射后代。12FT2115的自交后代中,鉴定出了纯合4RS-5DS.5DL易位系14T190-1、纯合5DS-4RS.4RL易位系14T150-11以及纯合4RS/5DS易位系14T150-27。从12FT2115的辐射后代中,鉴定出了含1对断裂5DS-4RS.4RL易位染色体的易位系15T305-12。从DTA4RLKu的辐射后代中,鉴定出了纯合4BL.4BS-4RL和4RL/5BL易位系14T201-11、含一条4RL-5BL.5BS易位染色体的易位系15T139-1以及含一条4RL/5BL易位染色体的易位系15T165-9。可根据这些易位系中4R染色体断裂位置的不同,将4R染色体区分为7个区段：区段S-1+S-2、区段S-3、区段S-4、区段L-1+L-2.1、区段L-2.2、区段L-2.3和区段L-3+L-4+L-5。3、基于SLAF-seq技术筛选黑麦Kustro 4R染色体特异的SLAF序列,再随机选择800条设计引物。对小麦／黑麦单体附加系MA1RKu-7RKu,进行PCR扩增,筛选到381个黑麦Kustro的4R染色体特异分子标记。4、利用鉴定出的4R二体附加系DA4RKu及其易位变异系,实现对Kustro 4R染色体特异分子标记进行染色体区段定位,最终有314个标记定位成功,定位到4R染色体的7个区段(区段S-1+S-2、区段S-3、区段S-4、区段L-1+L-2.1、区段L-2.2、区段L-2.3和区段L-3+L-4+L-5),特异分子标记的数目分别为109、9、19、27、18、6和126个。5、利用两套小麦-黑麦二体附加系DA1RKi-7RKi和DA1RI-7RI,对已筛选到的381个标记进行多态性验证。得到216个标记不具多态性,通用性好。得到148个标记在染色体4RKu、4RKi和4RI上具有多态性。