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目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对阿霉素肾病大鼠的治疗作用。
方法:贴壁培养法分离纯化大鼠MSCs体外培养和连续传代，在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化；利用四唑盐比色（MTT）法测定MSCs的生长曲线；流式细胞仪（FCM）鉴定MSCs膜抗原。将雄性SD大鼠，一次性尾静脉注射阿霉素（ADR）5mg/kg制作微小病变型肾病(MCNS)经典模型，注射ADR当日腹部手术情况下经腹主动脉，向双肾分别注射MSCs(1×107)（实验组）或等容量生理盐水(对照组)。于注射后7天、14天、28天分别杀检大鼠，检测24h尿蛋白水平、血清白蛋白(Alb) 、总胆固醇( TC) 、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），采用RT-PCR检测大鼠肾组织中nephrin mRNA的表达。28天时光镜、电镜下观察肾脏组织病理改变。
结果:1：原代分离的MSCs在接种后48h贴壁，细胞形态为椭圆形、多角形及短梭形，12天时细胞呈长梭形并达到90％单层融合，经传代扩增，细胞进一步纯化；细胞传代后2天内处于潜伏期，3天后进入生长期，7天后进入平台期；FCM检测CD45、CD90阳性率分别为0.86％、98.63％。2: 注射阿霉素后，大鼠均出现肾病综合征表现，以腹水、大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症为特征。蛋白尿于实验第7天开始升高，第28天达到高峰，正常组、对照组及实验组分别为( 5.44±1.20)mg/24 h、( 161.24±4.54)mg/24h及(36.34±32.87)mg/24h( P<0.05)，对照组及实验组TC分别为( 8.34±0.28)mmol/L及( 5.16±0.67)mmol/L(P<0.05)，Alb分别为( 15.70±2.14) g/L及( 28.06±1.64)g/L(P<0.05)。电镜显示：对照组肾脏上皮细胞足突广泛融合，而实验组肾脏组织学改变显著减轻，仅有部分足突融合。3：对照组肾组织nephrin mRNA的表达明显减少(P<0.05)，与对照组比较，实验组肾组织nephrinmRNA的表达增加(P<0.05)。
结论:贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSCs。MSCs通过增加肾组织内nephrin mRNA的表达起到对肾脏的保护作用。