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第一部分氨氯地平通过调节Smad2,7的表达防止庆大霉素所致大鼠肾小管间质纤维化目的：在庆大霉素所致大鼠肾小管间质纤维化损伤整体模型上,观察氨氯地平通过调节Smad2,7的表达对庆大霉素所致大鼠肾小管损伤的影响。方法：取SD大鼠28只,分正常对照组,庆大霉素模型组,氨氯地平2.5mg/kg+庆大霉素组,氨氯地平5mg/kg+庆大霉素组,每组7只。氨氯地平2.5mg/kg/d和5mg/kg/d给药组每日灌胃(i.g.)给药一次,给药体积为10mL/kg/d,连续给药8天。给药第2天,模型组及氨氯地平两个给药组腹腔注射(i.p.)庆大霉素100mg/kg/d(体积4mL/kg/d),连续7天,对照组给予相应体积的生理盐水。给药第8天置代谢笼中收集24h尿,检测尿蛋白含量及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、丫-谷氨酸转换酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)活性。大鼠称重后处死,收集血液标本检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量。大鼠肾脏用10%福尔马林固定,石蜡包埋切片后,HE染色,光镜观察肾组织形态学变化；原位缺口末端标记法(d-UTP nick and labeling,TUNEL)检测肾小管细胞凋亡情况；免疫组化SP法检测肾小管Smad2,Smad7表达水平；其余肾组织制备肾皮质匀浆,测定其丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性。结果：庆大霉素模型组大鼠的24h尿蛋白、血清BUN、SCr的含量明显升高,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)；肾脏病理组织学检查,庆大霉素模型组近曲小管上皮细胞浊肿,管腔内可见明显红细胞管型和蛋白管型,间质呈炎症反应,远曲小管腔内可见充血和红细胞管型,说明肾小管间质纤维化造模成功。氨氯地平呈剂量依赖性降低庆大霉素模型大鼠的24h尿蛋白含量,血清BUN、SCr含量及尿NAG、GGT、ALP活性的升高趋势,并且可明显降低肾组织MDA、 NO含量及NOS活力,提高SOD活性。氨氯地平给药组对庆大霉素引起的肾小管病理性损伤有明显的改善及恢复作用,仅见少量的蛋白管型和红细胞管型。同时,氨氯地平也明显抑制庆大霉素引起的肾小管细胞凋亡；氨氯地平给药组显著降低肾小管Smad2的表达而增加Smad7的表达。结论：氨氯地平通过调节Smad2,7的表达能防止庆大霉素所致大鼠肾小管间质纤维化的进程。第二部分氨氯地平通过调节Smad6,7的表达防止阿霉素所致大鼠肾小球系膜细胞的损伤目的：在阿霉素所致大鼠肾小球系膜细胞纤维化的模型上,观察氨氯地平通过调节Smad6,7的表达对阿霉素所致大鼠肾小球系膜细胞损伤的影响。方法：体外培养肾小球细膜细胞(MCs),并按照实验设计对细胞进行分组。分光光度法测定大鼠肾小球系膜细胞上清液LDH活性；Real-time PCR分析系膜细胞Smad6,7基因mRNA表达；Western blot分析系膜细胞Smad6,7蛋白表达；细胞免疫化学SP法检测系膜细胞Smad7的表达水平。结果：氨氯地平呈浓度依赖性降低阿霉素模型组细胞培养上清液中LDH的活性(P<0.01)：对阿霉素+TGF-β1组所致LDH活性的增加也能呈浓度依赖性降低,与阿霉素组比较具有显著差异(P<0.01)。Real-time PCR和Western blot分析显示,氨氯地平(10-7,10-6mol/L)显著上调阿霉素+TGF-β1组系膜细胞Smad6,7基因和蛋白的表达(P<0.01)；细胞免疫化学分析表明,氨氯地平能显著上调阿霉素+TGF-β1组所致系膜细胞Smad7的表达。结论：氨氯地平通过调节Smad6,7的表达防止阿霉素所致大鼠肾小球系膜细胞的损伤。