【摘 要】
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目的:本课题拟研究敲降circ-Pank1是否可以减轻Nrf2敲降导致的寡聚体形成和Ub C表达,用以推论敲降circ-Pank1可减轻Nrf2敲降导致的细胞应激,为今后课题组进一步研究circ-Pank1在Nrf2相关神经退行性疾病中的作用及机制提供实验依据。方法:1实验一Nrf2减少促进寡聚体形成及Ub C表达MN9D细胞随机分为对照组（NC）和敲降Nrf2组（si-Nrf2）。1.1采用Do
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目的:本课题拟研究敲降circ-Pank1是否可以减轻Nrf2敲降导致的寡聚体形成和Ub C表达,用以推论敲降circ-Pank1可减轻Nrf2敲降导致的细胞应激,为今后课题组进一步研究circ-Pank1在Nrf2相关神经退行性疾病中的作用及机制提供实验依据。方法:1实验一Nrf2减少促进寡聚体形成及Ub C表达MN9D细胞随机分为对照组（NC）和敲降Nrf2组（si-Nrf2）。1.1采用Dot blot检测敲降Nrf2后细胞中寡聚体的含量。1.2采用q RT-PCR检测敲降Nrf2后细胞中Ub C m RNA的表达变化。1.3采用免疫荧光细胞染色技术检测敲降Nrf2后细胞中泛素化蛋白的表达变化。1.4采用Western blot检测敲降Nrf2后细胞中泛素化蛋白的表达变化。2实验二敲降circ-Pank1缓解Nrf2减少导致的寡聚体形成和Ub C表达MN9D细胞随机分为对照组（si-Nrf2+NC）和敲降circ-Pank1组（si-Nrf2+sic-Pank1）。2.1采用Dot blot检测敲降circ-Pank1后细胞中寡聚体的含量。2.2采用q RT-PCR检测敲降circ-Pank1后细胞中Ub C m RNA的表达变化。2.3采用免疫荧光细胞化学染色技术检测敲降circ-Pank1后细胞中泛素化蛋白的表达变化。2.4采用Western blot检测敲降circ-Pank1后细胞中泛素化蛋白的表达变化。结果:1实验一Nrf2减少促进寡聚体形成及Ub C表达1.1 Dot blot结果显示:与对照组（NC）相比,Nrf2敲降组（si-Nrf2）的寡聚体含量显著增加（P<0.05）。1.2 q RT-PCR结果显示:与NC组相比,si-Nrf2组的Ub C m RNA表达水平显著增加（P<0.01）。1.3免疫荧光细胞染色技术（P<0.01）和Western blot（P<0.05）结果一致:与NC组相比,si-Nrf2组的泛素化蛋白表达显著增加。2实验二敲降circ-Pank1缓解Nrf2减少导致的寡聚体形成和Ub C表达2.1 Dot blot结果显示:与对照组（si-Nrf2+NC）相比,circ-Pank1敲降组（si-Nrf2+sic-Pank1）的寡聚体含量显著减少（P<0.05）。2.2 q RT-PCR结果显示:与si-Nrf2+NC相比,si-Nrf2+sic-Pank1组的Ub C m RNA表达水平显著减少（P<0.05）。2.3免疫荧光细胞染色技术（P<0.01）和Western blot（P<0.05）结果一致:与si-Nrf2+NC相比,si-Nrf2+sic-Pank1组的泛素化蛋白表达水平显著减少。结论:1.MN9D细胞中,Nrf2的减少促进寡聚体形成和Ub C表达的增加。2.MN9D细胞中,敲降circ-Pank1可减轻Nrf2减少导致的寡聚体形成和Ub C表达的增加。
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