论文部分内容阅读
目的：探讨用胰岛素(INS)提高肿瘤细胞生长代谢水平后对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响及其相关分子机制，为临床应用提供实验依据。 方法：以体外培养的人宫颈癌细胞株(Hela)为靶细胞，MTT法检测不同浓度DDP、不同浓度INS联合DDP(7.26 mg/L)、INS(5U/L)预作用不同时间后联合DDP(7.26 mg/L)对Hela细胞增殖抑制率的影响;Annexin V-FITC双染流式细胞术分析不同加药处理组细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况;Western Blot印迹方法检测细胞中JNK2、p-JNK2及caspase-3蛋白的表达情况。 结果：MTT结果显示:DDP单药以剂量依赖的方式抑制人宫颈癌Hela的增值。2.0-15.0 U/L浓度范围内的胰岛素联合DDP(7.26 mg/L)，其细胞毒作用明显高于单药DDP组(P＜0.01); INS(5U/L)作用3-15 h后联合DDP，其细胞毒作用明显高于单药DDP组(P＜0.01)。细胞凋亡结果显示:DDP组、INS联合DDP组均能促进细胞凋亡，且联合组细胞凋亡较DDP组更为明显(P＜0.01)。细胞周期结果显示:DDP组、INS组均能阻滞Hela于S期;两者联合作用后对Hela的S期阻滞作用明显高于DDP、INS单药组（P＜0.05）。Western blot结果显示:各用药组细胞中总JNK2蛋白表达无明显变化;与对照组相比，INS组中p-JNK2的表达差异不明显(P＞0.05)，DDP组和联合组p-JNK2表达与对照组相比则明显增高(P＜0.05)，其中联合组增高最明显，与DDP组比较有统计学差异(P＜0.01); caspase-3蛋白在INS组中表达较对照组相比无明显差异(P＞0.05)，而DDP组和联合组caspase-3表达与对照组相比则明显增高(P＜0.05)，其中联合组增高最明显，与DDP组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。 结论：一定时间及浓度范围内的INS作用于Hela具有明显化疗增效作用，INS用药的时间和浓度选择是实现增敏的关键。其机制可能为:INS能够使Hela的S期细胞比例增加，与DDP有协同作用。DDP能激活JNK信号传导通路达到促进肿瘤细胞凋亡的作用，INS化疗增敏作用亦可能与其联合DDP作用后增强JNK2磷酸化水平及caspase-3蛋白表达有关。