目的探究长链非编码RNA PUNISHER对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其与动脉粥样硬化的关系?方法12只健康纯种雄性4周龄载脂蛋白E(apolipoprotein,Apo E)基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠)通过高脂饲喂制/作动脉粥样硬化模型小鼠(模型组)12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系(HA-VSMC)根据转染情况分为小干扰-PUNISHER组和阴性对照(negative control,NC)组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的PUNISHER表达;通过合成PUNISHER的小干扰RNA作为反向对照抑制PUNISHER在人血管平滑肌细胞中的表达;应用实时荧光定量聚合酶链反应验证PUNISHER表达情况;分别采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,cck-8)、划痕实验、流式细胞术及线粒体染色检测抑制PUNISHER表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移、凋亡和线粒体分裂情况的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinylaspartae specific proteinase 3,caspase 3)、caspase8、p-p38、p53、OPA1等蛋白的表达。结果(1)血脂四项及血管苏木精-伊红染色(HE染色)证明动脉粥样硬化模型制作成功。荧光定量聚合酶链式反应结果显示,动脉粥样硬化模型小鼠血管的PUNISHER表达高于对照组,差异有统计学意义(t=9.597,p<0.05);(2)CCK-8法检测显示si-PUNISHER组的吸光度值在转染36h后低于NC组,差距有统计学意义(t36=2.638,p<0.05,t48=2.554,p<0.05);划痕实验显示si-PUNISHER组细胞迁移率低于NC组(t=3.136 p<0.05)(3)流式细胞术显示si-PUNISHER组中血管平滑肌细胞的凋亡细胞数多于NC组(x2=4.245,p<0.05);(4)经线粒体染色,共聚焦显微镜下观察到si-PUNISHER组细胞线粒体分裂明显多于NC组(5)蛋白印迹法显示si-PUNISHER组bcl-2、caspase3 30k D和p53蛋白表达明显低于NC组(tbcl-2=9.546,p<0.05,tcapase3 30KD=5.647,p<0.05,tp53=5.42,p<0.05),caspase3 17k D,OPA1蛋白表达水平高于NC组(tcaspase3 17k D=4.892,p<0.05,tOPA1=12.258,p<0.05)。结论抑制长链非编码RNA PUNISHER的表达可以促进血管平滑肌细胞线粒体分裂及凋亡。