应用固相聚合酶延伸反应的基因芯片检测技术

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该研究的内容包括两个方面:(1)基因芯片基片的制造,即固相支持物的选择和修饰过程,并应用于基因芯片的研制中.首次使用不加任何修饰的玻片,研究完整的玻片前期制备过程,及其对后期实验的影响,并取得了不俗的效果;(2)基因芯片聚合酶延伸检测技术的研究.将5<>-末端为氨基修饰寡聚脱氧核糖核苷酸片段点样于异硫氰酸酯修饰的玻片表面,制备成5<>-端氨基与玻片表面异硫氰基共价交联的寡核苷酸微阵列.当液相中存在与微阵列中的寡核苷酸相配对的目标核酸时,DNA聚合酶能够延伸寡核苷酸片段.实验证明在基因芯片上的寡核苷酸延伸技术能够用于基因突变检测.如果寡核苷酸片段与液相的目标序列完全配对,延伸效率比3<>-末端碱基不与目标序列配对的寡核苷酸片段高3倍以上.使延伸产物带上荧光标记,通过检测荧光的强度差异可以检测出错配的存在.
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