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目的:通过研究膀胱移行细胞乳头状癌(TCC)病变中,抑癌基因p16、p53、VHL的微小卫星DNA(MS)的杂合性丢失(LOH)的发生率,来揭示其与TCC不同分期、分级的关系,以求探寻到一种敏感性高、无创伤的、适合中国国情的TCC早期诊断方法;并探讨了MS及LOH的基因机制。 方法:随机提取50例膀胱TCC组织学标本DNA,并取相应病例的正常膀胱粘膜做对照;其中40例病人提取尿液标本DNA,取位于p16、p53、VHL的六个微小卫星标记物检测杂合性丢失。DNA提取采用酚-氯仿-异戊醇法,依上述微卫星位点的引物行PCR扩增后,采用8%变性聚丙烯酰胺电泳,银染观察结果。对40例尿液标本,同时进行尿脱落细胞组织学检查,并与微卫星检查进行比较,观察两种检查的敏感性差异。实验设计采用双盲法,各样本率之间比较采用卡方及确切概率检验,检验标准为p<0.05。 结果:1.50例膀胱TCC组织学标本中,上述六个微卫星位点,至少一个位点有LOH的阳性率为90%(45例);40例膀胱TCC尿液标本中,以上位点,至少一个位点有LOH的阳性率为87.5%(35例);40例TCC尿液标本中,脱落细胞组织学检查阳性率为62.5%(25例),而且主要见于中、晚期肿瘤。 2.在位于p16、p53、VHL上的六个微卫星位点中,LOH的阳硕士研究生学位论文性率由高到低分别为:D9s259(76.3%)、Dgs27OD17s786(50.0%)、D3s12 84(41.7%)、D3sl038(41.2)(65 .7%)、、D 1 75379(405%)。D9s259、D9s270、D3sl038、D17s786的LOH阳性率与膀肤TCC的分期、分级无关,故可用于膀肤肿瘤的早期诊断;D3s12 84、D17s379主要见于高分期、分级肿瘤,故可作为膀肤肿瘤预后判断的指标;上述结果,与国外报道的,有一致性,如D9s259、D9s270,表明TCC遗传演化的一致性;又略有不同,如p53上的D17s786,国外报道多见于高分期、分级膀肤 TCC,这体现膀眺肿瘤发生、进展的种族及病因学差异。 3.膀耽TCC的尿液微卫星分析较尿脱落细胞组织学分析敏感性高(p<0.05),且可用于肿瘤早期诊断。 结论:通过对膀肤TCC的组织标本和尿液标本的抑癌基因微卫星位点LOH检测,提示膀胧TCC的LOH检测是一项新颖、高敏感、无创伤、有着广阔前景的检测方法。