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t10,c12 CLA可通过降低乳腺上皮细胞内核转录因子nSREBP1的水平，引起牛奶乳脂率降低50％，降低牛乳营养成分，影响乳品质。本实验以牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)为模型，分别从转录、翻译后加工修饰以及降解调控水平研究t10,c12 CLA降低nSREBP1水平的调控机制。为缓解低乳脂症(MFD)，提高乳品质提供参考。 试验一：t10,c12 CLA对乳脂合成网络的影响 以MAC-T为模型，检测乳脂合成网络基因的表达，观察脂滴分泌情况。不同梯度t10,c12 CLA(0，75，150和300nM)处理MAC-T，westernblot筛选t10,c12 CLA对nSREBP1的最佳抑制浓度，用它处理MAC-T，RT-qPCR和western blot检测乳脂合成网络的mRNA丰度和蛋白丰度。结果显示，1) MAC-T能表达乳脂合成网络中的21个基因，能分泌脂滴；2)150 nM的t10,c12 CLA对nSREBP1的抑制效果最佳，并可显著降低ACACA，FASN，SCD1的mRNA丰度和SCD1的蛋白丰度。结果表明，MAC-T能作为本研究的模型，t10,c12 CLA通过降低nSREBP1的水平下调ACACA，FASN，SCD1的mRNA表达，抑制乳腺组织内乳脂从头合成。 试验二：t10,c12 CLA在转录和翻译后加工水平对nSREBP1的调控机制研究 为了揭示t10,c12 CLA对nSREBP1的调控机制，本研究观察150nMt10,c12 CLA从不同水平调控乳腺上皮细胞内从nSREBP1基因的表达情况；结果显示，SCAP和INSIG1的蛋白丰度显著降低，因此，t10，c12 CLA可能通过下调SCAP和INSIG1的蛋白表达妨碍pSREBP1从内质网转运至Golgi进行加工，引起nSREBP1减少。 试验三：t10,c12 CLA在nSREBP1降解过程中的作用机制 抑制26S蛋白酶体活性的基础上添加150nMt10,c12 CLA，结果显示，SREBP1的mRNA丰度、pSREBP1和nSREBP1的蛋白丰度下降极显著，而SCAP的mRNA丰度反而上调，导致SCAP的蛋白丰度与对照组相比无显著变化。表明，在26S蛋白酶体被抑制后，t10,c12 CLA通过某机制极显著下调了SREBP1的mRNA表达，即使SCAP的蛋白无显著变化，pSREBP1和nSREBP1的水平依旧下降显著。 综上所述，t10，c12 CLA通过下调SCAP和INSIG1蛋白表达，影响pSREBP1从内质网转运至Golgi的过程，使得进入Golgi加工的pSREBP1减少，最终导致MFD现象的发生。