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目的:表观治疗药物5-氮杂胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)联合抗PD-L1(programmed death ligand 1)单抗对食管癌细胞株KYSE450进行免疫和表观治疗,探讨表观治疗药物5-Aza对食管癌细胞KYSE450的PD-L1蛋白表达变化,以及联合单克隆抗体治疗对食管癌细胞株KYSE450基因、蛋白表达和生长状态之间的关系。检测PD-L1(programmed death ligand 1)和DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferases 1,DNMT1)的表达在食管癌细胞株KYSE450生长状态改变情况。方法:1.采用5-Aza治疗食管癌细胞株KYSE450,蛋白印记杂交技术检测细胞中PD-L1蛋白表达,观察5-Aza药物治疗后对肿瘤细胞中PD-L1蛋白表达变化。2.建立体外诱导肿瘤特异性淋巴细胞与KYSE450食管癌细胞进行混合培养,观察模拟体外免疫系统5-Aza药物与抗PD-L1单抗联合的作用进行分析。3.应用甲基化特异性PCR检测DNMT1基因和PD-L1基因启动子区域甲基化状态改变情况。4.应用实时荧光定量PCR技术检测用药治疗后DNMT1基因和PD-L1基因mRNA的表达改变。5.应用Western blot检测用药后各组DNMT1基因和PD-L1基因蛋白表达改变。6.应用ELISA检测细胞外分泌的PD-L1蛋白变化。7.细胞划痕试验鉴定KYSE450食管癌细胞株的细胞侵袭、转移能力。结果:1.5-Aza治疗KYSE450食管癌细胞72h后,PD-L1蛋白表达增加;2.成熟的DC细胞与KYSE450食管癌细胞混合培养时可见二者相互结合3.治疗组的DNMT1、PD-L1基因蛋白、甲基化表达比对照组低,DNMT1呈现递减的趋势。4.QRT-PCR结果发现,治疗组5-Aza处理后的PD-L1的m RNA表达比对照组高,抗体组与混合组均比对照组表达低;5.Western blot结果显示,药物治疗组的DNMT1蛋白表达比对照组低,5-Aza治疗组的PD-L1蛋白比对照组明显增高,抗体组与混合组均比对照组表达低。6.比较各组细胞上清中的PD-L1水平,各治疗组的浓度明显低于对照组(P<0.05)。7.细胞划痕试验结果显示联合用药治疗后对食管癌细胞株KYSE450的细胞侵袭、转移能力有明显下降作用。结论:1.5-Aza治疗KYSE450细胞可使PD-1/PD-L1信号通路增强。2.表观药物5-Aza联合抗PD-L1单抗治疗时,在肿瘤特异性CTL的作用下对食管癌细胞的增殖、侵袭较单一治疗明显抑制。3.抗PD-L1抗体联合甲基化抑制剂对体外诱导细胞毒性T淋巴细胞与KYSE450抗原负载作用下的PD-L1蛋白表达、mRNA转录水平、PD-L1启动子甲基化状态的影响及细胞分泌蛋白、侵袭、转移能力有着密切的相关。4.抗PD-L1单抗进行免疫治疗有效的同时可能会引起非DNA序列改变,使细胞株呈现低甲基化状态,使细胞基因重编程序或者提升T细胞的活化和功能发挥。5.抗体治疗联合5-Aza进行检测发现DNA甲基化在T淋巴细胞的基因表达中起着调控作用,可使外周血T细胞DNA失去一定程度的甲基化,促使多种分子的表达分泌。