论文部分内容阅读
本研究分为两个部分。
第一部分研究了粘细菌遗传因子,包括天然质粒、噬菌体和染色体复制区OriC。粘细菌不仅具有多细胞行为还能产生很多新颖结构的次生代谢产物。然而,几十年来由于缺乏能够在粘细菌中进行自主复制的质粒阻止了其遗传操作的发展。本研究对约150株粘细菌进行了内源质粒的检测,从橙色粘球菌(Myxococcus,fulvus)124B02中发现了一个环型质粒,命名为pMF1。测序分析显示,这个质粒长18,634 bp,G+C含量为68.7%。它编码了23个开放阅读框,其中14个不与任何已知序列同源。随后鉴定了这个质粒的基本复制区,并构建了大肠杆菌和粘细菌的穿梭载体。利用这个载体克隆了粘细菌的pilA基因,导入pilA至突变型菌株DKl0410后,可恢复其表型。对pMF1的复制机制进行了初步研究,在大肠杆菌中克隆和过量表达了复制蛋白RepA(由pMF1.14基因编码)。Northern杂交显示复制区有约2.2 kb和1.2 kb的阳性杂交带。Southern杂交没有发现单链DNA的存在,推测质粒以θ复制方式进行复制。利用脉冲电泳技术在菌株003B05中发现了一条约40 kb的DNA带,对Lamda外切酶和大肠杆菌外切酶Ⅲ处理均敏感,暗示该DNA为末端未保护的线型分子(可能是噬菌体DNA)。本研究预测了粘细菌染色体上两段可能是复制起点OriC的DNA区段,将其分别克隆至质粒pZJY1中。二个质粒均可以转化粘细菌并得到抗性转化子。
第二部分对中草药植物的内生放线菌进行了研究。从上海市植物园采集了87种中草药植物,总共分离和初步鉴定了约560株内生放线菌。统计发现从草本植物中分离的内生放线菌的数量多于木本植物中分离的,并且从植物的地上部分分离到的内生放线菌多于地下部分分离的。检测了560株内生放线菌的抑菌活性,发现其中84株(约占15%)对金黄色葡萄球菌有抑菌活性,36株(约6%)对白色念珠菌有抑菌活性,暗示中草药植物的内生放线菌可能是抗菌新药的一个来源。同时检测了9种中草药植物的水或乙醇抽提液对金黄色葡萄球菌的抑菌活性,发现内生放线菌菌株的抑菌活性与其宿主植物没有明显的对应关系。通过对内生菌抑菌活性的检测,找到一株抑菌活性较强的菌株,并构建了基因组文库。接着对约200株菌进行了内源质粒的检测,发现15株含有环型质粒,其中10株茵中的大于80 kb;另外,14株内生放线菌中有线型质粒,最大的约800 kb。