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目的:胃癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤之一,我国又是世界上胃癌高发地区之一。胃癌根治术后患者,即使加上辅助性化疗,5年生存率也不过40%。因此,深入对胃癌的病因和发病机制的研究,寻求新的防治靶点和干预策略无疑对提高胃癌的疗效具有重要意义。近年来,在预防和治疗胃癌的领域里有关细胞迁移侵袭和细胞周期调控的相关研究显示了巨大的潜力,细胞水平调控蛋白的系列研究有望在深入阐述胃癌发病机制的同时为胃癌的治疗提供新的作用靶点。本研究前期通过双向电泳和质谱鉴定在胃癌和癌旁正常黏膜组织分离出70种有差异表达的蛋白质,之后通过Western-blot及RT-PCR初步筛选,选择在胃癌中表达下降明显且尚未深入研究的蛋白ERp29进行相关研究。首先,通过应用组织芯片技术结合免疫组化法对170对胃癌组织与对应癌旁正常黏膜组织中ERp29的表达水平进行检测,结果显示ERp29的表达在胃癌中与性别、淋巴结转移、TNM分期等临床病理参数密切相关(P<0.05)。上述研究结果表明ERp29可能在胃癌细胞的增殖、侵袭及转移中发挥一定的作用。方法:首相,通过western-blot鉴定各种胃癌细胞株里ERp29的表达情况,选择两株胃癌细胞株运用四质粒慢病毒包埋法构建ERp29过表达稳转细胞株,采用CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、Transwell侵袭、划痕愈合等实验观察ERp29对胃癌细胞生长、增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。其后构建沉默的稳转细胞株并进行相同的细胞行为学实验进一步验证结果可靠性。之后再通过体内试验进一步验证ERp29对胃癌的影响力。通过Wester-blot验证ERp29是通过何种机制改变胃癌细胞的增殖转移能力,并利用Gene set enrichment analysis寻找ERp29可能影响的机制通路,Western-blot验证该机制通路。最后使用抑制剂反向证明ERp29与该信号通路的相关性。结果:1.通过Western-blot验证各胃癌细胞株ERp29表达量,选用低分化胃癌细胞MGC803,与中分化的胃癌细胞SGC7901作为构建稳转株的细胞系;2.ERp29过表达细胞株MGC803和SGC7901的细胞生物学行为实验结果表明ERp29在胃癌内抑制胃癌细胞的侵袭迁移能力,但与增殖无相联;3.ERp29沉默细胞株MGC803得到与过表达相反的实验结果,sh-ERp29 MGC803的迁移侵袭能力增强,与增殖未见关联;4.裸鼠尾静脉肺转移模型结果表明,ERp29过表达组的肺癌组织切片癌结节数减少且更小。5.运用RT-PCR证明ERp29表达量的变化与MET标志物的RNA水平变化有关联;并通过免疫荧光及Western-blot进一步证明ERp29与MET相关联;6.GESA plot结果表明ERp29与PI3K/Akt信号通路相关;Western-blot结果发现高表达ERp29胃癌细胞株内pAkt(Ser473)、pAkt(Thr308)表达量下降,GSK3β(Ser9)表达量上调;p-mTOR在ERp29表达量增高时下调,β-catenin的免疫印迹结果无变化;7.对sh-ERp29 MGC803使用PI3K抑制剂LY294002后,该细胞株的迁移侵袭能力明显受到抑制,进一步证明ERp29通过PI3K-AKT信号通路抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力。结论:ERp29能够抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力,但对胃癌细胞增殖无影响。ERp29抑制胃癌细胞侵袭迁移能力的机理是通过促进MET,更进一步的机制是能够通过抑制PI3K/Akt信号通路从而导致MET现象。