泰山照山白生物活性研究及其有效成分的高速逆流色谱分离

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目的:本论文是泰安市大学生科技创新项目“一种含照山白成分生物杀虫剂的研制”(No.2014D056)和“照山白杀虫成分的分离和纯化”(No.2015D065)的部分工作内容。测定泰山照山白枝叶对家蝇的生物活性,对泰山照山白进行提取并确定其对家蝇的主要活性部位。对泰山照山白主要活性部位进行高速逆流提取,得到单体化合物并进行结构确证,测定单体化合物的生物活性。方法:通过泰山照山白枝叶粉末与家蝇饲料混合的方法测定泰山照山白对家蝇的生物活性。对照山白枝叶粉末进行石油醚索式提取然后95%乙醇浸泡提取,蒸干提取液装硅胶柱并分别用二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇冲洗,然后对石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇提取部位分别进行家蝇生物活性实验确定主要活性部位。筛选活性部位的高速逆流条件并进行高速逆流提取,测定提取物的生物活性。结果:研究发现照山白枝叶粉末对家蝇有较好的产卵忌避、生长发育抑制作用。在泰山照山白枝叶粉末对家蝇的生物活性实验中,本文证明了泰山照山白枝叶粉末对家蝇产卵忌避作用的最低有效浓度为4%,忌避作用有效期为60小时,质量分数为5%的照山白枝叶粉末能抑制家蝇幼虫的生长发育,使其发育迟缓,发育历期延长0.8天左右。照山白粉末对家蝇卵的孵化率并无显著影响。通过家蝇活性实验,确定了乙酸乙酯提取部位为家蝇幼虫主要活性部位。通过优化实验比较,我们确定了泰山照山白乙酸乙酯提取部位的高速逆流提取体系为石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水=5:5:4:6,固定相保留值为55%;流速为2.0 mL/min,温度为25℃,转速为800 r/min。通过高速逆流对泰山照山白乙酸乙酯部位的提取最终的到了1个单体化合物,经鉴定为槲皮素。对高速逆流分离的两个组分进行家蝇幼虫生长发育抑制实验,未证明有生物活性。结论:泰山照山白枝叶对家蝇有良好的生物活性,高速逆流色谱通过合适的溶剂体系与实验条件,能够实现对泰山照山白有效成分的分离。高速逆流色谱不使用固态载体,从而不会造成由于不可逆吸附引起的样品损失、失活与变性等,所以高速逆流色谱在天然产物有效成分的分离方面非常适用。意义:本课题首次验证了泰山照山白对家蝇的生物活性,操作简便,易于开发。本课题首次用高速逆流色谱对泰山照山白进行了提取并得到单体化合物,为泰山照山白的进一步开发利用打下坚实的基础。
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