长链非编码RNA LINC01606经由Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌侵袭转移的实验研究

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目的:探寻胃癌相关长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)LINC01606的临床表达特征、生物学功能及应用于胃癌诊断与预后评估的潜在临床价值。方法:(1)据前期芯片实验数据,筛选出在胃癌组织中高表达的LINC01606,使用RT-qPCR在胃癌及癌旁正常组织(n=75)、胃癌细胞系及正常胃粘膜上皮细胞系中进一步验证其表达情况。(2)结合患者的临床病理资料,分析胃癌组织中LINC01606的表达量与临床病理特征的关联。(3)RT-qPCR检测对比胃癌患者(n=48)与健康对照者(n=20)血浆LINC01606表达量差异,并分析胃癌患者血浆LINC01606的表达量与肿瘤大小、TNM分期的联系。ROC曲线评估血浆LINC01606对于胃癌诊断的临床价值。(4)使用在线工具预测LINC01606可能作为ceRNA互补结合miR-423-5p,可能参与调控Wnt信号通路,并通过体外实验研究证实。(5)通过RT-qPCR检测胃癌及癌旁正常组织(n=75)中Wnt信号通路关键分子mRNA水平变化,并使用相关性分析推测该信号通路是否与LINC01606存在相互调控关系。(6)细胞学实验中,特异性抑制剂JW74阻断Wnt/β-catenin信号通路后,检测LINC01606、miR-423-5p的表达量以及Wnt3a mRNA和蛋白水平变化,transwell、划痕实验评估胃癌侵袭迁移能力变化。结果:(1)LINC01606在胃癌组织和胃癌细胞中表达水平是升高的。(2)胃癌组织中LINC01606表达量与胃癌患者淋巴结转移和TNM分期正相关,与血清总蛋白、血清白蛋白负相关,且是胃癌转移侵袭的独立危险因素。(3)胃癌患者血浆LINC01606的表达量高于健康对照者,并且其表达水平与TNM分期有关,与肿瘤大小无关。血浆LINC01606ROC曲线下面积0.871,敏感性89.13%,特异性75.00%,对胃癌的诊断和预后判断具备一定的临床价值。(4)胃癌组织中Wnt/β-catenin信号通路关键分子mRNA表达水平高于癌旁组织,且与LINC01606的表达量成正相关。(5)在线工具预测miR-423-5p有着与LINC01606及Wnt3a mRNA互补结合的位点。(6)JW74处理胃癌细胞,抑制了Wnt/β-catenin信号通路,LINC01606、miR-423-5p表达减少,Wnt3a mRNA和蛋白表达随之减少,并且减弱了胃癌细胞的侵袭迁移能力。结论:(1)LINC01606在胃癌组织及胃癌细胞系中高表达,并与胃癌淋巴转移、TNM分期正相关,与胃癌患者血清总蛋白、白蛋白负相关。研究结果提示LINC01606可能参与促进了胃癌的侵袭转移的调控。(2)血浆LINC01606表达水平对于胃癌的诊断和预后判断具有潜在临床应用价值,LINC01606表达水平越高,肿瘤分期越晚,预后可能越差。(3)LINC01606可能通过ceRNA机制结合miR-423-5p促进Wnt3a的表达,增强Wnt/β-catenin信号,使Wnt/β-catenin信号通路在胃癌患者中呈过度激活状态,从而促进胃癌侵袭、转移。相反Wnt/β-catenint信号通路的抑制也可减低LINC01606的表达。
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