背景及目的：　　胸腺瘤是成人前上纵隔肿瘤中最常见的，发病率无明显的性别差异。胸腺作为特殊的免疫器官组织结构复杂，细胞形态多样化。胸腺瘤细胞经常在病理形态学上表现为良性形态，而在临床生长上又出现恶性的侵袭行为。病理科医生往往很难简单地从“胸腺瘤”和“胸腺癌”之间上划一条明确的病理组织学界线。为了更准确地做出病理诊断，常需要借助特殊肿瘤标记物染色的表达情况作为诊断的鉴别依据。骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)是一种含有钙结合域、凝血酶裂解位点等28个功能结合区的生物学功能复杂的带负电的非胶原性骨基质糖基化的磷酸蛋白，参与了炎症、肿瘤的生长发生和发展、转移等多种生理、病理行为。我们应用免疫组织化学SP法来检测OPN在胸腺瘤组织中的表达状况，从而研讨OPN在胸腺瘤的临床诊断意义和对病人预后的判断与指导。　　方法：　　1临床资料　　收集并分析赣南医学院一附院和赣州市人民医院2012年6至2013年12月胸腺瘤手术切除标本的完整病例资料60例。男病患37例、女病患23例；病人年龄21-70岁，平均年龄50.2岁。病例当选标准为术前已经通过高分辨率螺旋CT胸部检查诊断为前上纵隔肿瘤，且均未进行过临床放射治疗和/或化学治疗（生物疗法）才可以入选。病例资料按术后Masaoka分期标准进行统计分析：有I期病例35例、Ⅱ期病例14例、Ⅲ期病例8例、Ⅳ期病例3例（各期病例均包含）。根据术后组织送病理检查结果(2004年正式的胸腺瘤WHO组织分型标准)本组病例中：有A型14例、AB型23例、B型21例及C型2例。另外同期通过自先天或后天性心脏病手术等取得18例正常胸腺组织定为空白对照组，空白对照组有10例男性,8例女性，年龄35-65岁，平均年龄48.7岁。　　2试剂和方法　　所有标本均用10％中性甲醛液固定，常规石蜡在包埋框内包埋。切成2张连续切片(4um厚)，1张用来做免疫组化染色，用1张来做HE染色复核诊断。使用SP法为免疫组织化学染色方法，使用事先准备好的梯度二甲苯溶液和梯度乙醇溶液脱蜡和水化后，用3％的H2O2溶液灭活内源性过氧化物酶（室温反应10min）；然后枸橼酸缓冲液在微波炉加热15 min修复抗原，自然冷却后滴加非免疫性山羊血清封闭液在37℃室温下充分反应20min以阻断切片中组织的非特异性抗原抗体结合；按1:100的比例稀释OPN兔抗人单克隆抗体（一抗）后滴加OPN鼠抗人单抗抗体，在4℃保湿条件下让切片充分反应过夜；配置好的磷酸盐缓冲液即PBS液(Phosphate buffered solution)均匀清洗切片2min/次×3次；滴加生物素化的羊抗兔IgG二抗，37℃室温下孵育反应20min；PBS液再次洗涤切片5min/次×4次；再依次滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶液、二氨基苯胺DAB显色液，用显微镜观察控制1-2 min二氨基苯胺DAB显色液的显色反应时间；使用苏木素液复染，然后脱水梯度乙醇溶液脱水，二甲苯透明，最后封片用中性树胶。HE染色按常规进行。使用的全部生物试剂盒都是从武汉谷歌生物科技有限公司购买的。　　3免疫组织化学结果和判断方法　　采用副主任及以上医师2名（病理科），通过观察光学显微镜下的免疫复合物沉积部位和免疫反应强度（必要时观察HE染色切片作对照）。当细胞膜和（或）细胞浆出现棕黄色沉积视作阳性反应，病理报告结果采取双盲法。另每张玻片在40×10倍视野下选取5个视野测定各自的总灰度值及扫描面积，在病理科副主任以上医师（含副主任医师）的指导下利用医学彩色图文分析系统（HMIAS-2000高清晰度）免疫组化测量程序测定所有经免疫组织化学染色的切片中免疫反应阳性单位值及阳性颗粒平匀灰度（分别计算阳性细胞的扫描面积及总灰度参数但以平均灰度表示）。　　4统计方法　　使用SPSS14.0统计学软件，计算其基本统计量，对计数资料用均数±标准差（-x±s）来表示，组与组的对比采用One-Way ANOVA分析，两两之间对比采用LSD法检验。以α=0.05作为检验水准，认为P＜0.05有显著统计学意义。　　结果：　　免疫组织化学SP法检测显示病理切片中胸腺瘤肿瘤细胞的细胞浆中和细胞膜上有较高密度的OPN表达（胞膜和/或细胞浆出现棕黄色沉积），在肿瘤周围基质、炎症细胞及血管内皮细胞胞浆中有少量弥散的OPN表达，在正常胸腺组织中不表达或较少表达。OPN在胸腺瘤组中的阳性颗粒的平匀灰度和阳性单位值统计学上明显高于正常胸腺组织组（P<0.05）；OPN在胸腺瘤Masaoka分期各组间阳性颗粒的平均灰度和阳性单位值差异均有统计学意义（P<0.05）；OPN在胸腺瘤WHO分型各组间的阳性颗粒平均灰度和阳性单位值差异均有统计学意义（P<0.05）。　　结论：　　1. OPN在胸腺瘤的形成、浸润和转移中起密切相关的作用，影响了胸腺瘤的形成、可能与胸腺瘤的恶性程度、侵袭性、转移有关。　　2. OPN有助于胸腺瘤的早期诊断，并有助于判断其形成、恶性程度、侵袭性。　　3. OPN表达为胸腺瘤临床诊断和患者预后判断提供了一个重要参考指标。