束缚应激与CRH升高通过激活TNF-α系统损伤小鼠卵母细胞的发育能力

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随着社会的发展,生活节奏的加快,人们承受的心理压力越来越大,心理应激会造成雌性生殖障碍,导致不孕,流产等各种疾病。束缚应激是最经典的心理应激模型之一。研究表明束缚应激会激活HPA(下丘脑-垂体-肾上腺)轴,并导致血清和卵巢中促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotrophin-releasing Hormone,CRH)含量升高从而诱导壁颗粒细胞凋亡,但其机制尚不清楚。实验室前期研究表明CRH水平升高通过Fas/FasL系统诱导壁颗粒细胞及卵母细胞的凋亡;但FasL突变的gld小鼠实验中,也存在束缚应激诱导细胞凋亡,这表明束缚应激可能激活除Fas/FasL系统以外的其他通路。TNF-α系统同样可以诱导多种组织和细胞的凋亡,但应激过程中CRH是否也会通过TNF-α系统诱导壁颗粒细胞(MGCs)凋亡,从而损伤卵母细胞的发育能力却未见报道。本研究验证束缚应激与CRH升高是否通过TNF-α系统影响卵母细胞的发育能力。通过体内、体外实验检测小鼠卵母细胞发育能力、MGCs与卵母细胞的凋亡情况以及TNF-α系统的激活来探究束缚应激通过TNF-α系统损伤卵母细胞发育能力的机制。在卵母细胞未成熟时给予束缚应激,体内实验结果表明,束缚应激后,小鼠囊胚率与囊胚细胞数均显著下降,卵母细胞及壁颗粒细胞的凋亡比例显著增加,血清、卵巢及壁颗粒细胞中的TNF-α与TNFR1蛋白表达量均显著升高。体外实验结果表明,培养壁颗粒细胞,CRH处理组壁颗粒细胞的TNF-α与TNFR1蛋白表达量和细胞凋亡比例均显著升高,而同时添加CRH及其拮抗剂antalarmin后,壁颗粒细胞中TNF-α与TNFR1蛋白表达量和细胞凋亡比例与添加CRH组相比均显著下降,CRH的损伤作用被逆转。通过体内敲除TNF-α、注射TNF-α拮抗剂etanercep以及RNAi技术体外敲低TNF-α均可显著减轻束缚应激及CRH对卵母细胞发育能力和凋亡及MGCs凋亡的不利影响。结果表明束缚应激及CRH的升高可以通过激活TNF-α系统影响卵母细胞的发育能力,且可采用TNF-α拮抗剂来改善心理应激对卵母细胞的不利影响。
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