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目的:研究肝癌组织中COTE1的表达与自噬的相关性,以及干扰COTE1在肝癌细胞PLC/PRF/5中的表达对化疗药物阿霉素和5-氟尿嘧啶的敏感性变化的影响。方法:(1)选取25例肝癌组织切片,通过免疫组织化学技术检测COTE1蛋白与自噬相关蛋白LC3的表达情况,并分析其相关性。(2)通过RNAi干扰技术沉默肝癌细胞PLC/PRF/5中COTE1的表达,选出干扰较佳的siRNA序列,再将含有该序列的COTE1-shRNA包装进入慢病毒载体,通过慢病毒转染入PLC/PRF/5肝癌细胞,在嘌呤霉素筛选下,得到COTE1稳定沉默表达的细胞株,采用QPCR和Western Blot方法检测COTE1在mRNA和蛋白水平的表达情况,证明慢病毒的干扰效果。同时利用蛋白质印迹法检测下调肝癌细胞中COTE1蛋白的表达后,自噬相关蛋白LC3的表达情况,进一步分析COTE1与自噬的相关性。(3)用不同浓度的化疗药物阿霉素和5-氟尿嘧啶处理转染COTE1-shRNA慢病毒及对照的肝癌细胞株,通过CCK-8法检测下调COTE1的表达后,肝癌细胞PLC/PRF/5对化疗药物的敏感性是否有变化,并利用Western Blot检测细胞自噬水平的改变,以及用流式细胞术检测细胞凋亡水平的变化。结果:(1)免疫组织化学结果显示,25例肝癌组织切片中,有20例COTE1阳性表达,有8例LC3阳性表达,卡方检验结果显示肝癌中COTE1的表达与自噬相关蛋白LC3的表达相关具有统计学意义(P<0.05)。(2)通过siRNA转染肝癌细胞,Western Blot结果证明两条siRNA序列均能有效的干扰COTE1的表达,选取其中一条包装进入慢病毒,通过慢病毒转染两天后,我们在荧光显微镜下观察到大量绿色荧光,而未转染病毒的空白无荧光,提示转染成功,经过0.1μg/ml的嘌呤霉素筛选一周后,利用QPCR技术和蛋白印迹法检测,结果显示PLC/PRF/5肝癌细胞中COTE1基因在mRNA水平以及蛋白质水平的表达均发生了明显的下调(P<0.05),证明稳定下调COTE1表达的细胞株建立成功;此外,通过Western Blot检测发现,干扰COTE1表达后,LC3-II/LC3-I表达减少(P<0.05),进一步证明了肝癌细胞中COTE1的表达与自噬存在一定的相关性。(3)用不同浓度的化疗药物阿霉素和5-氟尿嘧啶处理细胞48小时后,CCK-8实验结果显示,肝癌细胞的增殖抑制率随着化疗药物的作用浓度增高而升高,同时,化疗药物对转染COTE1-shRNA的肝癌细胞的增殖抑制率要高于对照组(P<0.05);Western Blot和流式细胞术结果显示,下调COTE1的表达后,肝癌细胞的自噬水平被抑制,凋亡水平增高(P<0.05)。结论:(1)肝癌中COTE1的表达与自噬存在相关性,下调肝癌细胞中COTE1的表达能够抑制肝癌细胞的自噬水平。(2)干扰肝癌细胞中COTE1表达,能够通过抑制自噬或增强凋亡来提高肿瘤细胞对化疗药物阿霉素和5-氟尿嘧啶的敏感性。