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目的:原核表达并纯化含有黑色素瘤相关基因MAGE-A3与蛋白转导结构域Tat-PTD(protein transduction domain,PTD)的融合蛋白,观察Tat-PTD介导MAGE-A3进入小鼠骨髓来源的树突状细胞的跨膜效应及MAGE-A3在细胞中的定位,检测融合蛋白对树突状细胞功能的影响。方法:1)构建p ET28a(+)-Tat-MAGE-A3-EGFP、p ET28a(+)-MAGE-A3-EGFP和p ET28a(+)-Tat-EGFP原核表达载体,经IPTG诱导并在E.coli BL21(DE3)中表达,经SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定并通过Ni+-NTA柱纯化获得Tat-MAGE-A3-EGFP、MAGE-A3-EGFP、Tat-EGFP三种融合蛋白;2)体外分离培养C57BL/6J小鼠骨髓源性DC:加入重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(m GM-CSF)、重组m IL-4培养5天,再滴加TNF-α、MAGE-A3、Tat-MAGE-A3-EGFP、Tat-EGFP诱导其成熟。3)动态荧光显微镜观察融合蛋白跨膜效应及其在细胞中的分布。流式细胞术观察DC摄取融合蛋白的能力和效率并检测DC表面分子CD11c、CD80、CD86的表达情况。结果:1)成功构建了p ET28a(+)-Tat-MAGE-A3-EGFP、p ET28a(+)-MAGE-A3-EGFP和p ET28a(+)-Tat-EGFP原核表达载体,并获得了Tat-MAGE-A3-EGFP、MAGE-A3-EGFP和Tat-EGFP三种融合蛋白。2)体外成功诱导培养小鼠髓源性DC,获得率为94.1%,成熟的DC表面分子CD80、CD86达到97.8%。3)并未观察到目标蛋白Tat-MAGE-A3-EGFP具有预期的跨膜作用,流式细胞术检测DC摄取该蛋白的能力也未见明显提高(25.55%vs 0.27%),但融合蛋白能促进DC的成熟。结论:利用大肠杆菌表达带有蛋白转导结构域的融合蛋白并不一定具有预期的跨膜效应,可能与原核表达系统无法对真核蛋白进行正确的折叠和修饰有关,但可促进树突状细胞成熟。