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本研究探讨了叶酸对水牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,以期提高水牛卵母细胞的成熟率和囊胚发育率,为后续胚胎分割的相关研究提供更多的胚胎。同时,本研究还探讨不同质量的囊胚、囊胚分割前后冷冻和不同时期的冷冻胚胎对水牛胚胎分割效果的影响,并将分割胚进行胚胎移植,以期生产同卵双胎的后代并提高水牛胚胎分割的效率。具体研究内容分为以下两部分:
研究一,探讨体外成熟培养液中添加不同浓度的叶酸(1 ng/mL、10ng/mL和100 ng/mL)对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。结果发现:(1)10 ng/mL组和100 ng/mL组的卵丘扩展指数均显著高于对照组(P＜0.05),而1 ng/mL组与对照组、10 ng/mL组和100 ng/mL组差异均不显著(P＞0.05);(2)10 ng/mL组的成熟率显著高于对照组、1ng/mL组和100 ng/mL组(P＜0.05);(3)各组卵母细胞的谷胱甘肽含量差异不显著(P＞0.05);(4)10 ng/mL组的囊胚发育率极显著高于对照组、1ng/mL组和100 ng/mL组(P＜0.01);(5)各组的囊胚细胞数差异不显著(P＞0.05)。上述结果表明,成熟培养液中添加10 ng/mL的叶酸能显著提高水牛卵母细胞的体外成熟率和囊胚发育率。
研究二,探讨不同质量的囊胚、囊胚分割前后冷冻及不同时期的冷冻胚胎对分割效果的影响,并将新鲜和冷冻胚胎的半胚移植给受体。结果表明:(1)A级囊胚的分割成功率、半胚发育率及半胚细胞数均极显著高于B级囊胚和C级囊胚(P＜0.01),且B级囊胚和C级囊胚之间也差异极显著(P＜0.01);(2)冷冻囊胚的分割成功率与未冷冻囊胚差异不显著(P＞0.05),但囊胚冷冻后分割组的半胚发育率显著高于分割后冷冻组(P＜0.05);(3)扩张囊胚的冷冻存活率显著高于孵化囊胚(P＜0.05),但囊胚与扩张囊胚、孵化囊胚差异不显著(P＞0.05),囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚冻胚的分割成功率、半胚发育率差异均不显著(P＞0.05);(4)将分割获得的新鲜胚胎半胚(5对)和冷冻胚胎的半胚(5对),分别移植给10头受体母牛,有3头受体妊娠,其中1头是移植了冻胚的半胚。上述结果表明,(1)水牛A级囊胚的分割效果比B级囊胚和C级囊胚好;(2)水牛囊胚冷冻后分割比分割后冷冻能获得更高的半胚发育率;(3)水牛囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚的冷冻胚胎均适合分割;(4)水牛新鲜和冷冻胚胎的半胚移植后均获可得妊娠。