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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，无论在发展中国家或是发达国家，其发病率均为女性恶性肿瘤的首位，是年轻和中年女性癌症患者死亡的主要病因。对于乳腺癌患者而言5年生存率伴随着诊断期别的增加而逐步下降。研究资料表明，临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌5年生存率分别是80％、52％、42％和14％。可以看出乳腺癌的早期诊断及治疗对乳腺癌患者的预后及长期生存有着举足轻重的意义。因此，寻找一个既方便又相对准确的新型无创生物标志物，通过对其进行提取、鉴定及分析来预测肿瘤的发生，为乳腺癌的早期诊断提供依据仍然是尚未实现的重要临床挑战。液体活检作为一种非侵入性方法目前在癌症领域具有广阔的应用前景，正在迅速进入临床实践。这个新兴领域可以很好的弥补传统的组织活检的局限性，而作为近期液体活检领域之一的细胞外囊泡也已经越来越引起人们的高度关注。细胞外囊泡为一种直径为30-1000nm的纳米级脂质包裹体结构，内部包裹了蛋白质、mRNA和miRNA等物质。包括肿瘤细胞在内的几乎所有类型的细胞，都可以产生并释放胞外囊泡。肿瘤来源的细胞外囊泡与肿瘤微环境中的免疫效应细胞发生作用并且将信号传递给循环中的这些受体细胞以干扰其抗肿瘤的功能。目前，越来越多的研究集中在乳腺癌细胞来源的细胞外囊泡所携带的信息和它们在乳腺癌发生和发展中的用途。此外，乳腺癌细胞来源的细胞外囊泡作为乳腺癌诊断，预后和预测性生物标志物的用途也已被研究。 目的：寻找乳腺癌细胞株细胞外囊泡中存在的可能的生物标志物；寻找乳腺癌细胞细胞外囊泡的形态特点和所包含miRNA的差异特性，通过对差异miRNA的基因分析，寻找可能涉及自噬调节的乳腺癌细胞系细胞外囊泡中的候选靶基因。 方法：采用无血清外泌体对正常乳腺上皮细胞HMEC和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7进行培养，通过纳米粒径分析对胞外囊泡颗粒大小和含量分布进行分析，并用投射电镜观察胞外囊泡形态，采用western blot技术检测胞外囊泡膜蛋白标记物CD63。通过高通量测序对胞外囊泡中miRNA进行测序分析。并通过GO富集和KEGG富集分析研究差异miRNA对应的与自噬相关候选靶基因。 结果：通过多峰粒径分析显示，HMEC胞外囊泡粒径分布主要在1.9±0.4nm，15.1±3.6nm,157±43.1nm，含量分别为21.6%，23.8%，27.4%。MDA-MB-231胞外囊泡粒径分布主要在5.9±1.7nm，42.8±9.8nm，含量分别为28.3%,22.9%。MCF-7胞外囊泡粒径分布主要在18.4±4.2nm，202.8±52.4nm，含量分别为22.8%，25.8%。通过对胞外囊泡形态和膜标记物鉴定，三株细胞均可检测到具有典型特征的胞外囊泡和标记物CD63表达。通过miRNA高通量测序分析，HMEC、MCF-7、MDA-MB-231胞外囊泡中共有已知miRNA分别为613、333、698个，进行差异比较分析发现，MCF-7比HMEC的胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为108个和86个，MDA-MB-231比HMEC胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为135个，和246个，MDA-MB-231比MCF-7胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为127个和209个。通过对MDA-MB-231、MCF-7与HMEC差异miRNA的GO富集和KEGG富集分析，发现差异miRNA所对应的候选靶基因涉及多种生物学功能，尤其这些差异miRNA可调控自噬通路上的关键基因。 结论：不同乳腺癌细胞株细胞外囊泡不论从直径和数量分布，还是所含miRNA都与正常乳腺上皮细胞存在很大差异，而不同乳腺癌细胞株之间也存在着巨大差异。乳腺癌细胞株胞外囊泡所携带的差异miRNA可能对其自身或作用的靶细胞的自噬水平产生不同影响，其机制有待进一步研究揭示。