新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(N.caninum)寄生在宿主体内引起多种家畜共患的原虫病,此病对牛的危害尤为严重,主要造成母牛流产、产死胎以及新生犊牛的运动神经系统疾病,给畜牧业造成了巨大的经济损失。迄今为止,还没有防治新孢子虫病的疫苗和有效药物,对新孢子虫病的早期确诊是目前控制该病发生和蔓延的重要手段。我国对该领域的研究起步较晚,但近年来逐渐系统和深入。为更好地了解新疆地区流产奶牛新孢子虫病的感染情况,从奶牛主要产区选定15个地区共20个较大规模牛场采集了419头流产史奶牛的血清,应用VMRD公司生产的进口ELISA试剂盒对其进行了抗体检测,并用chahan B建立的rELISA方法进行了复检。ELISA试剂盒检测结果表明,在419份被检血清中有43份为阳性,新孢子虫阳性率为10.26%,各个地区的牛场阳性率在0-50%之间,不同地区流产奶牛新孢子虫病阳性率差异显著(P<0.05);各个年龄段流产奶牛阳性率差异不显著(P>0.05);不同胎次的流产奶牛阳性率差异显著(P<0.05)。rELISA方法检测结果表明,419份血清中有47份阳性,阳性率为11.22%,说明新疆地区存在新孢子虫的感染。根据GenBank上发表的新孢子虫NcSRS2基因序列,设计合成一对引物,以新孢子虫标准虫株为模板,PCR方法扩增NcSRS2基因,与pMD18-T Simple载体连接并转化到DH5α宿主菌中,提取质粒,酶切后并测序验证,获得阳性重组质粒pMD18-T-NcSRS2t。阳性质粒pMD18-T-NcSRS2t和表达载体pGEX-4T-3质粒,经EcoRⅠ酶切后分别回收,连接,转化到表达菌E.coli BL21,提取质粒,酶切后并测序验证,将构建的重组载体命名为pGEX-4T-NcSRS2t。阳性菌株在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,表达产物与预期大小相符,约60.2kDa,为建立新孢子虫病免疫学诊断方法及研制低成本、高特异性的新孢子虫病诊断试剂盒奠定基础。