奈达铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3和SKOV3/DDP凋亡及机制探讨

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目的:研究奈达铂(NDP)体外对人卵巢癌原发耐药细胞株SKOV3和继发性耐药细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制作用,探讨NDP诱导凋亡、抗肿瘤的作用机制,为临床上顺铂耐药的卵巢癌治疗提供更多的参考依据。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同作用时段、不同浓度的NDP对SKOV3和SKOV3/DDP细胞的生长抑制作用,并计算其半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪(FCM)检测加药前后SKOV3和SKOV3ODDP细胞凋亡及细胞周期分布的变化;倒置相差显微镜观察NDP处理卵巢癌细胞前后的形态学变化;吖啶橙(AO)染色后在荧光显微镜下进一步观察卵巢癌正常细胞和凋亡细胞的形态学特征;RT-PCR检测加药前后,细胞凋亡基因Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9及反映肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的表达变化。应用SPSS16.0软件进行统计分析,采用方差分析、t检验进行统计学处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、NDP能显著抑制SKoV3和SKOV3/DDP细胞增殖,在一定浓度范围和作用时段内,NDP对两种细胞的抑制率呈时间-剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。2、FCM检测结果显示,NDP能诱导SKOV3和SKoV3/DDP细胞凋亡,在一定浓度范围和作用时段内,随着时间、剂量增加,两种细胞的凋亡率均增加,差异有统计学意义(P<0.05);NDP作用SKOV3和SKOV3/DDP细胞后,随着时间、剂量增加,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,差异均有统计学意义(P<0.05),G2/M期细胞比例无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05),细胞周期被阻滞在S期。3、倒置相差显微镜下观察NDP作用SKOV3和SKOV3/DDP细胞后,细胞生长受到抑制,出现典型的细胞凋亡形态学变化;荧光显微镜下观察经AO染色的SKOV3和SKOV3/DDP细胞,可见NDP处理后出现核固缩和凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。4、与对照组相比,经NDP处理后的SKOV3和SKOV3/DDP细胞的Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax、Caspase3、Caspase9表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、NDP体外能显著抑制人卵巢癌顺铂原发耐药细胞SKOV3和继发性耐药细胞SKOV3/DDP的增殖,作用机制可能与诱导凋亡,将细胞周期阻滞在S期,上调Bax、Caspase3、Caspase9基因的表达,下调细胞Bcl-2基因的表达有关。2、奈达铂能下调卵巢癌耐药细胞MMP-2的表达,可能有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力。3、NDP体外对人卵巢癌顺铂耐药细胞有明显的抑制作用,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力,有望成为临床上顺铂耐药的卵巢癌治疗的有效铂类药物。
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