【摘 要】
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目的镍化合物和反式-BPDE是环境污染物和致癌物,但其致癌的机制仍不是很清楚.该研究采用甲基化敏感的限制性指纹技术(MSRF)对结晶型NiS和反式-BPDE诱导转化和裸鼠接种成瘤的
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目的镍化合物和反式-BPDE是环境污染物和致癌物,但其致癌的机制仍不是很清楚.该研究采用甲基化敏感的限制性指纹技术(MSRF)对结晶型NiS和反式-BPDE诱导转化和裸鼠接种成瘤的永生化人支气管上皮细胞(16HBE)基因组DNA的CpG岛甲基化的情况进行检测,寻找DNA甲基化异常的基因片段及敏感的生物监测指标,以探讨其致癌机制.方法1、采用Laird PW提供的哺乳动物DNA抽提方法对结晶型NiS和反式-BPDE诱导转化16HBE细胞及接种裸鼠成瘤的16HBE细胞抽提基因组DNA.2、经限制性内切酶MseI单独酶切或限制性内切酶MseI与BstuI双重酶切后,其产物采用甲基化敏感的限制性指纹识别技术(MSRF)进行分析,寻找异常甲基化基因片断.3、将回收纯化的目的基因片断连接到pMD18-T载体,转化到DH5 α感受态细菌构建测序载体.将初筛阳性克隆菌液进行PCR扩增和双酶切鉴定后测序,并对测序结果用Blast进行基因同源性分析比较.结论1、MSRF方法检测DNA甲基化,发现引物对P6与P8,P3与P9,P1与P4,P5与P7,P8与P9比较敏感,其中P6与P8为引物对的PCR扩增产物显示出DNA异常甲基化基因片段.2、四条目的基因片段,它们分别与编码蛋白基因DKFZp761D221,鼻咽癌易感性蛋白ANKRD11和HOXA3基因都有高度同源性,提示HOXA3,ANKRD11基因等的CpG高甲基化可能使细胞基因表达调控异常,引起细胞分化和增殖异常,导致肿瘤的发生.3、结晶型NiS诱导转化及成瘤的16HBE细胞基因组DNA存在高甲基化的DNA片段,提示DNA甲基化的水平改变可能是镍化合物致癌发生的另一个途径.4、BPDE转化与成瘤细胞基因组DNA没表现出异常甲基化,其致癌机制可能不涉及DNA甲基化异常.
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