[目的]　　1.建立体内Matrigel血管生成模型，利用该模型研究肥大细胞类糜蛋白酶(mast cell chymase，MC-Chy)的促血管生成作用。　　2.利用体内Matrigel血管生成模型研究肥大细胞羧肽酶(mast cellcarboxypeptidase，MC-CP)在血管生成中的作用，以及MC-CP对MC-Chy促血管生成作用的影响。　　[方法]　　1.建立小鼠体内Matrigel血管生成模型，研究人MC-Chy的促血管生成作用。　　(1)大量提取人MC-Chy真核表达质粒pcDNA3.1/S-Chy。　　(2)人MC-Chy真核表达质粒与Matrigel混合后于小鼠腹股沟部皮下注射，建立体内Matrigel血管生成模型，分别设立生理盐水及MC-Chy抑制剂对照组。　　(3)实验第12天处死小鼠，取出胶体组织并切半，一半以4ml/g的比例加入超纯水用于血红蛋白(Hb)及酶活性的测定，另一半用4％甲醛固定常规包埋切片，用于HE染色和血管内皮细胞(CD34)免疫组织化学(IHC)染色并计数血管密度(MVD)。　　2.人肥大细胞羧肽酶真核表达质粒(pcDNA3.1/MC-CP)体内表达的研究。　　(1)分别大量提取人MC-CP分泌型与非分泌型真核表达质粒pcDNA3.1/S-CP、 pcDNA3.1/CP。　　(2)利用质粒DNA pcDNA3.1/S-CP和pcDNA3.1/CP分别通过皮下及肌肉两种途径进行小鼠注射，用ELISA法检测上述两种质粒DNA在小鼠体内的表达情况。　　(3)质粒DNA在体内Matrigel血管生成模型中表达的检测，质粒DNApcDNA3.1/S-CP和pcDNA3.1/CP分别与Matrigel混合后于小鼠腹股沟皮下注射，实验的第12天处死小鼠，取出Matrigel检测是否具有活性MC-CP的表达。　　3.MC-CP在血管生成中的作用，以及MC-CP对MC-Chy促血管生成作用的影响。　　(1)分离大鼠腹腔肥大细胞(RPMCs)。　　(2)用钙离子载体(A23187)刺激RPMCs，使其活化脱颗粒，产生具有MC-CP与MC-Chy活性的细胞活化产物。　　(3)利用体内Matrigel血管生成模型，研究MC-CP在血管生成中作用，以及MC-CP对MC-Chy促血管生成作用的影响。　　[结果]　　1.成功建立BALB/c小鼠体内Matrigel血管生成模型，用于分析人MC-Chy在血管生成中的作用，胶体组织中可以检测到具有酶活性的MC-Chy，血红蛋白(Hb)含量分析显示，pcDNA3.1/S-Chy表达质粒处理组的Hb含量明显比对照组高;HE染色及IHC染色发现pcDNA3.1/S-Chy质粒处理组的血管密度高于对照组，表明人MC-Chy具有促血管生的成作用。而MC-Chy的特异性抑制剂CHI(Chymostatin, CHI)组与对照组没有显著差异，提示该作用可以被MC-Chy的特异性抑制剂CHI所抑制。　　2.质粒DNA pcDNA3.1/S-CP与pcDNA3.1/CP分别通过皮下及肌肉注射两种途径进行小鼠注射，ELISA法可以检测到上述两种质粒DNA在小鼠体内的表达，而在体内Matrigel血管生成模型中未检测到具有活性的人MC-CP。　　3.成功分离RPMCs，用钙离子载体(A23187)刺激后，获得具有MC-CP与MC-Chy活性的细胞活化产物，体内Matrigel血管生成模型显示MC-Chy可以显著的促进血管生成，而未检测到MC-CP明显的促血管生成作用，也未观察到MC-CP对MC-Chy促血管生成作用的影响。　　[结论]　　1.成功建立体内Matrigel血管生成模型，用该模型研究表明人MC-Chy真核表达质粒pcDNA3.1/S-Chy体内表达的MC-Chy具有促血管生成的作用，同时该作用可以被MC-Chy的特异性抑制剂CHI(Chymostatin，CHI)抑制。　　2.质粒DNA pcDNA3.1/S-CP和pcDNA3.1/CP分别通过皮下及肌肉注射两种途径进行小鼠注射，均可以检测到二者在体内的表达，而在体内Matrigel血管生成模型中未检测到活性MC-CP的表达，提示该方法可能无法表达出具有活性的人MC-CP。　　3.体内Matrigel血管生成模型显示RPMCs活化脱颗粒产生的MC-Chy可以显著的促进血管生成，而未观察到RPMCs活化脱颗粒产生的MC-CP有明显的促血管生成作用，也未观察到MC-CP对MC-Chy的促血管生成作用有明显影响。