为了给水产致病菌的快速诊断及免疫防控提供理论依据和应用基础，本研究应用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)设计了4套LAMP引物，分别建立了可以同时检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法及大菱鲆弧菌和鱼肠道弧菌的双重LAMP方法。本研究我们选择创伤弧菌的metalloprotease基因，副溶血弧菌的ompA基因，设计LAMP扩增反应引物，通过对这两组引物分别改造，在内引物之间加入不同的酶切位点，并进行了时间和温度的优化，进行双重LAMP反应，结果发现针对创伤弧菌和副溶血弧菌所建立的双重LAMP检测方法在62℃45 min即可完成反应；而选择大菱鲆弧菌的luxR基因，鱼肠道弧菌的ToxR基因，设计LAMP扩增反应引物，同样进行了时间和温度的优化，通过对这两组引物分别改造，在内引物之间加入不同的酶切位点，分别进行双重LAMP反应实验，结果发现针对大菱鲆弧菌和鱼肠道弧菌的双重LAMP反应，62℃45 min即可完成反应；通过对17株菌株进行双重LAMP反应，产物经限制性核酸酶切分析，电泳结果显示，所建立的双重LAMP检测方法，可以检测到对应的靶细菌，证明特异性良好；并且所建立的两种双重LAMP反应通过灵敏度实验验证了所建立的两种双重LAMP检测技术最低检出率为8×103 CFU/ml（8 CFU/反应），比普通PCR高2-3个数量级，在养殖场的样品检测中用所建立的两种双重LAMP检测方法均可检测到这四种弧菌。　　本实验中建立的两种双重LAMP检测方法可实现方便快捷检测创伤弧菌、副溶血弧菌、鱼肠道弧菌和大菱鲆弧菌的存在；另外，双重LAMP反应的扩增产物可以通过限制性酶切来区分病原菌的种类。该方法具有操作简单、快速、便捷、成本低廉、特异性强和灵敏度较高等特点，可用于基层养殖场对这两种弧菌的快速检测和早期诊断，为四种弧菌的病害防治奠定了基础。